Descripción del proyecto
LOS PROCESOS DE FOSFORILACION-DEFOSFORILACION PROTEICA JUEGAN UN PAPEL PRIMORDIAL EN PRACTICAMENTE TODOS LOS ASPECTOS DE LA FUNCION CELULAR, INCLUYENDO LA TRANSDUCCION DE SEÑAL, CICLO CELULAR Y APOPTOSIS, LA CARACTERIZACION DE LOS COMPONENTES DEL FOSFOPROTEOMA Y DE SUS PERFILES DE FOSFORILACION EN DIFERENTES CONDICIONES ES, EN CONSECUENCIA, DE VITAL IMPORTANCIA PARA LA COMPRENSION DE LOS MECANISMOS CELULARES IMPLICADOS EN LA ENFERMEDAD Y PARA EL DESAROLLO DE NUEVOS FARMACOS DIRIGIDOS A MODULAR LA ACTIVIDAD DE QUINASAS Y FOSFATASAS, EL NUMERO DE SUBSTRATOS IN VIVO CONOCIDOS DE ESTAS ENZIMAS ES, SIN EMBARGO, TODAVIA MUY REDUCIDO Y EN LOS ULTIMOS AÑOS SE ESTA REALIZANDO UN ESFUERZO IMPORTANTE PARA SU CARACTERIZACION,EN EL PROYECTO BIO2004-01788, NUESTRO GRUPO ABORDO EL ESTUDIO DEL FOSFOPROTEOMA DEL LINFOCITO T HUMANO, COMO MODELO DE INTERES EN EL ESTUDIO DE LA TRANSDUCCION DE SEÑAL Y DE LOS DESEQUILIBRIOS DE LA RESPUESTA INMUNE, CON OBJETO DE DEFINIR LOS SUBSTRATOS DE FOSFORILACION IN VIVO EN ESTAS CELULAS, HASTA HOY, HEMOS CARACTERIZADO 331 PUNTOS DE FOSFORILACION EN UN TOTAL DE 322 FOSFOPEPTIDOS UNICOS CORRESPONDIENTES A 247 PROTEINAS, ALREDEDOR DE LA MITAD DE ESTOS PUNTOS DE FOSFORILACION NO SE ENCUENTRAN ANOTADOS EN SWISSPROT NI EXPERIMENTALMENTE NI POR SIMILITUD, EN EL CASO DE FOSFORILACION EN SER LA COLECCION PERMITE DEFINIR, AL MENOS, 4 MOTIVOS CLAROS DE FOSFORILACION, ESTA COLECCION ES LA UNICA EXISTENTE HASTA EL MOMENTO EN LINFOCITOS T HUMANOS Y ESTA EN PROCESO DE ANOTACION EN LA BASE DE DATOS SWISSPROT,EN ESTE PROYECTO PROPONEMOS 1) APROVECHAR LAS METODOLOGIAS PUESTAS A PUNTO EN EL PROYECTO ANTERIOR PARA AMPLIAR LA BASE DE DATOS DE PUNTOS DE FOSFORILACION EN EL FOSFOPROTEOMA DE CELULAS T HUMANAS YA DISPONIBLE Y, 2) ESTUDIAR MEDIANTE TECNICAS DE PROTEOMICA CUANTITATIVA EL FOSFOPROTEOMA DE LINFOCITOS T CD4+ Y CD8+, EN ESTADO DE REPOSO O ACTIVADOS, DE FORMA FISIOLOGICA O FARMACOLOGICA (ANTI-CD3/ANTI-CD28 Y PMA/IONOMICINA), CON OBJETO DE DEFINIR LOS SUBSTRATOS DE FOSFORILACION DURANTE LA RESPUESTA CELULAR Y DETERMINAR LOS PERFILES DE EXPRESION CARACTERISTICOS DE ESTAS VIAS DE ACTIVACION, LOS PERFILES DE FOSFORILACION GLOBAL PODRAN SER UTILIZADOS PARA LA CARACTERIZACION DE MARCADORES BIOLOGICOS DEL ESTADO CELULAR QUE PUDIERAN CONSTITUIR MARCADORES DE DIAGNOSTICO O PRONOSTICO EN SITUACIONES DE HIPERSENSIBILIDAD E INMUNODEPRESION, LA CARACTERIZACION DE LOS MOTIVOS DE FOSFORILACION PERMITIRA ASIMISMO DEFINIR POSIBLES QUINASAS DE RELEVANCIA FISIOLOGICA, ASI COMO LOS MECANISMOS RELACIONADOS CON LA REGULACION DE LA ACTIVIDAD PROTEICA, ESTA INFORMACION CONSTITUYE EL PRIMER PASO PARA EL DISEÑO DE NUEVAS TERAPIAS BASADAS EN FARMACOS REGULADORES DE LA ACTIVIDAD DE QUINASAS Y FOSFATASAS O DE OTRAS PROTEINAS SITUADAS EN PUNTOS CLAVES DE LAS VIAS AFECTADAS, fosfoproteómica\proteómica cuantitativa\activación linfocitaria\respuesta inmune