Descripción del proyecto
LAS ENZIMAS SON CATALIZADORES ESENCIALES EN LA INDUSTRIA DE ALIMENTOS, SIN EMBARGO, SU APLICACION SE ENCUENTRA RESTRINGIDA EN ALGUNOS CASOS POR LIMITACIONES DE ESTABILIDAD, ADEMAS, LA EFICIENCIA ENZIMATICA ES EN MUCHAS OCASIONES EL PRINCIPAL CUELLO DE BOTELLA EN EL RENDIMIENTO FINAL DEL PRODUCTO, LA INGENIERIA DE PROTEINAS SE PUEDE UTILIZAR PARA EL DESARROLLO DE NUEVAS VARIANTES ENZIMATICAS CON PROPIEDADES MEJORADAS, EN ESTE CONTEXTO, LAS GLICOSIDO-HIDROLASAS (GHS) SON CANDIDATAS MUY INTERESANTES PARA ESTE TIPO DE APROXIMACION, EN LOS ULTIMOS AÑOS, SE ESTA PRESTANDO UNA ATENCION ESPECIAL A NUEVAS APLICACIONES DE ESTAS ENZIMAS, INCLUYENDO LA PREPARACION DE PRODUCTOS LACTEOS SIN LACTOSA, OLIGOSACARIDOS PREBIOTICOS O GLICOCONJUGADOS DE MOLECULAS BIOACTIVAS, ALGUNAS GHS SON CAPACES DE SINTETIZAR OLIGOSACARIDOS PREBIOTICOS MEDIANTE UNA REACCION DE TRANSGLICOSILACION QUE COMPITE CON LA HIDROLISIS, EL RENDIMIENTO DEL PRODUCTO FINAL DEPENDE DE DETERMINANTES ESTRUCTURALES SUSCEPTIBLES DE SER INGENIERIZADOS PARA MEJORAR SU EFICIENCIA, LA INMOVILIZACION DE PROTEINAS FACILITA EL RECICLADO DEL ENZIMA Y EVITA QUE SE LIBERE AL PRODUCTO FINAL, ADEMAS, TAMBIEN PUEDE MEJORAR LA ESTABILIDAD Y LAS PROPIEDADES CATALITICAS DEL ENZIMA, LA CONSTRUCCION DE PROTEINAS HIBRIDAS QUE INCLUYAN MODULOS CON AFINIDAD POR UN SOPORTE SOLIDO PUEDE REDUCIR LOS COSTES DE PURIFICACION, PROPICIANDO LA UNION SELECTIVA DEL ENZIMA QUIMERICO, POR TANTO, EL ANALISIS DE LAS PROPIEDADES DE UNION DE ESTOS MODULOS ES CRITICO PARA ESTAS APLICACIONES, EL PRESENTE SUBPROYECTO PRETENDE GENERAR UN REPERTORIO DE ENZIMAS CON MAYOR EFICACIA, NUEVAS ACTIVIDADES CATALITICAS O SUSCEPTIBLES DE SER INMOVILIZADAS EN SOPORTES ECONOMICOS, PARA ALCANZAR ESTA META SE PLANTEAN TRES OBJETIVOS ESPECIFICOS:1, MEJORA DE LA EFICIENCIA Y ESTABILIDAD ENZIMATICA, SE APLICARA EL DISEÑO RACIONAL PARA MEJORAR LA EFICACIA DE LAS ENZIMAS SELECCIONADAS POR OTROS SOCIOS DEL PROYECTO COMO MEJORES CANDIDATAS PARA LA GLICOSILACION DE COMPUESTOS BIOACTIVOS, LA ESTABILIDAD ENZIMATICA SE INCREMENTARA COMBINADO APROXIMACIONES DE MUTAGENESIS DIRIGIDA Y EVOLUCION DIRIGIDA, CON EL OBJETIVO DE INCREMENTAR LA VIDA UTIL DE ENZIMAS DE RELEVANCIA INDUSTRIAL, SE INCLUIRA TAMBIEN EN ESTE ESTUDIO UNA GLUCOSA OXIDASA, YA QUE SE HA DESCRITO QUE REDUCE LA INHIBICION POR PRODUCTO EN REACCIONES DE TRANSGLICOSILACION,2, CARACTERIZACION ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE MODULOS NO CATALITICOS, EL OBJETIVO FINAL DE ESTE ESTUDIO ES OBTENER ENZIMAS HIBRIDAS CON NUEVAS PROPIEDADES, SE ESTUDIARAN DIVERSOS MODULOS DE UNION A CARBOHIDRATOS ANALIZANDO SU CAPACIDAD PARA MEDIAR LA INMOVILIZACION DE ENZIMAS GLICOSIDICAS (BETA-GALACTOSIDASAS Y QUITINASAS) A CELULOSA O QUITINA, SE ESTUDIARA TAMBIEN EL PAPEL DE MODULOS DE ADHESION A CELULAS, PRESENTES EN LA GLUCOAMILASA DE LEVADURA Y EN FLOCULINAS, EN LA INMOVILIZACION DE ENZIMAS SOBRE PLASTICOS O SOBRE LA SUPERFICIE DE MICROORGANISMOS GRAS,3, BIOSINTESIS DE OLIGOSACARIDOS MEDIANTE GLICOSIDASAS INGENIERIZADAS, SE OPTIMIZARA LA PRODUCCION DE FRUCTO-OLIGOSACARIDOS MEDIANTE LA INGENIERIZACION DE LA INVERTASA DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE MIENTRAS QUE LA SINTESIS DE GALACTO-OLIGOSACARIDOS SE ABORDARA UTILIZANDO DIFERENTES β-GALACTOSIDASAS INGENIERIZADAS, SE ENSAYARA LA COMBINACION DE AMBOS TIPOS DE ENZIMA PARA LA SINTESIS DEL DISACARIDO PREBIOTICO LACTULOSA, INGENIERÍA ENZIMÁTICA\ GLICÓSIDO-HIDROLASA\ INMOVILIZACIÓN DE PROTEÍNAS\ PREBIÓTICO\ ALIMENTO FUNCIONAL\ BETA-GALACTOSIDASA\ INVERTASA\ QUITINASA