Descripción del proyecto
LA DIFERENCIACION DEL XILEMA CULMINA CON LA MUERTE CELULAR DE LAS CELULAS QUE FORMAN ESTA PARTE DE LA VASCULATURA. TRABAJO PREVIO DE NUESTRO LABORATORIO Y DE OTROS GRUPOS MUESTRA QUE LA TERMOESPERMINA TIENE UN PAPEL FUNDAMENTAL EN EL ESTABLECIMIENTO CORRECTO DEL MOMENTO EN EL QUE DEBE PRODUCIRSE LA MUERTE CELULAR, YA QUE LOS MUTANTES ACL5 (DEFICIENTES EN LA SINTESIS DE TERMOESPERMINA) PRESENTAN UNA MUERTE CELULAR PREMATURA IMPIDIENDO LA CORRECTA DEPOSICION DE LIGNINA EN LA CELULAS QUE SE ESTAN DIFERENCIANDO A METAXILEMA. EN UN RASTREO DE SUPRESORES EXTRAGENICOS DE ACL5, HEMOS ENCONTRADO MUTANTES DOMINANTES QUE RECUPERAN LA CORRECTA MUERTE CELULAR. LAS MUTACIONES SE LOCALIZAN EN LA 5-UTR DE UNA SUBFAMILIA DE FACTORES DE TRANSCRIPCION BHLH A LOS QUE HEMOS LLAMADO AJAX. LA TERMOESPERMINA ES NECESARIA PARA LA TRADUCCION DE LAS PROTEINAS AJAX, Y LA SUPERPRODUCCION DE AJAX CONTRARRESTA EL EFECTO CAUSADO POR LA FALTA DE TERMOESPERMINA. POR ELLO, NUESTRA HIPOTESIS DE TRABAJO ES QUE LOS GENES AJAX MEDIAN EL CONTROL DE LA MUERTE CELULAR POR TERMOESPERMINA DURANTE LA DIFERENCIACION DEL XILEMA. LOS OBJETIVOS ULTIMOS DEL PROYECTO SON: (A) REUNIR EVIDENCIA EXPERIMENTAL SOBRE LA RELEVANCIA FUNCIONAL DE LOS GENES AJAX EN LA REGULACION TRANSCRIPCIONAL DE LA MUERTE CELULAR DURANTE LA DIFERENCIACION DEL XILEMA, Y (B) EVALUAR EL USO DE LA TERMOESPERMINA Y DE LOS GENES AJAX COMO POSIBLES HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS PARA MODIFICAR LAS PROPIEDADES DEL XILEMA (Y LA MADERA) EN ESPECIES LEÑOSAS. CON ESTE FIN, LOS OBJETIVOS PARTICULARES QUE PROPONEMOS SON: (1) ANALIZAR EL PAPEL DE LA TERMOESPERMINA EN LA REGULACION DE LA TRADUCCION DE LOS AJAX. IMPLICA LA RECONSTRUCCION IN VITRO DE UN SISTEMA DE TRADUCCION PARA INVESTIGAR EL MECANISMO MOLECULAR DE DICHA REGULACION. (2) EL ANALISIS MOLECULAR DE INTERACTORES DE LOS FACTORES DE TRANSCRIPCION AJAX. LA BUSQUEDA DE INTERACTORES POR DOBLE HIBRIDO EN LEVADURA ESTA JUSTIFICADA POR LA FALTA DE UN DOMINIO BASICO EN LA REGION BHLH DE LOS AJAX Y SU INCAPACIDAD PARA UNIRSE DIRECTAMENTE AL DNA. (3) INVESTIGAR EL PAPEL DE LOS AJAX EN EL CONTROL TRANSCRIPCIONAL DE LA MUERTE CELULAR. ESTO SE HARA MEDIANTE EL ANALISIS TRANSCRIPTOMICO DE NUEVOS ALELOS CONDICIONALES DE AJAX GENERADOS POR NOSOTROS. Y (4) PROBAR LA UTILIDAD DE ACL5 Y AJAX COMO HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS PARA MODIFICAR LA PRODUCCION DE MADERA. SE GENERARAN ALAMOS TRANSGENICOS CON EXPRESION AUMENTADA DE LOS ORTOLOGOS EN POPULUS PARA RETRASAR LA MUERTE CELULAR DEL XILEMA Y AUMENTAR EL PERIODO DE DEPOSICION DE LIGNINA. ILEMA\POPULUS\ARABIDOPSIS\FACTORES DE TRANSCRIPCION\GENES AJAX\TERMOESPERMINA