IDENTIFICACION DE NUEVOS ELEMENTOS DE LA RUTA DE LOS MICROARN EN ARABIDOPSIS THA...
EN LOS ULTIMOS AÑOS SE HAN INCORPORADO PEQUEÑOS ARN, COMO LOS MICROARN (MIARN) Y LOS ARN PEQUEÑOS E INTERFERENTES (SIARN), AL INVENTARIO DE LOS MECANISMOS DE REGULACION DE LA EXPRESION GENICA QUE PARTICIPAN EN EL CONTROL DEL DESAR...
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Descripción del proyecto
EN LOS ULTIMOS AÑOS SE HAN INCORPORADO PEQUEÑOS ARN, COMO LOS MICROARN (MIARN) Y LOS ARN PEQUEÑOS E INTERFERENTES (SIARN), AL INVENTARIO DE LOS MECANISMOS DE REGULACION DE LA EXPRESION GENICA QUE PARTICIPAN EN EL CONTROL DEL DESARROLLO DE LOS EUCARIOTAS PLURICELULARES, EN LA PLANTA MODELO ARABIDOPSIS THALIANA, UNO DE LOS COMPONENTES DEL COMPLEJO DE SILENCIAMIENTO MEDIADO POR MIARN (RISC) ES EL PRODUCTO DEL GEN ARGONAUTE1 (AGO1), CUYOS ALELOS MUTANTES AGO1 PERTURBAN NUMEROSOS ASPECTOS DEL DESARROLLO Y EN LOS CASOS MAS EXTREMOS CAUSAN LETALIDAD O ESTERILIDAD, HEMOS AISLADO DOS MUTANTES VIABLES Y MODERADAMENTE FERTILES, AGO1-51 Y AGO1-52, Y OBTENIDO SUS DOBLES MUTANTES CON ALELOS DE OTROS GENES DE LA MAQUINARIA DE LOS MIARN Y DE ALGUNA DE SUS DIANAS QUE TAMBIEN HEMOS IDENTIFICADO, TODOS LOS DOBLES MUTANTES MANIFESTARON SINERGIA FENOTIPICA, TAL COMO CABIA ESPERAR DE LA RELACION FUNCIONAL QUE EXISTE ENTRE LAS MUTACIONES IMPLICADAS, MEDIANTE UN ANALISIS GLOBAL DE LA EXPRESION GENICA CON MICROMATRICES, HEMOS COMPROBADO QUE EN EL MUTANTE AGO1-52, ASI COMO EN EL RESTO DE LOS MUTANTES DE LA MAQUINARIA IDENTIFICADOS EN NUESTRO LABORATORIO, SE ACUMULAN LOS ARNM DE DIANAS CONOCIDAS DE MIARN, LO ANTERIOR NOS MOVIO A REALIZAR UNA MUTAGENESIS CON METANOSULFONATO DE ETILO DE SEMILLAS AGO1-52 PARA ENCONTRAR MODIFICADORES DE SU FENOTIPO, HEMOS ESCUTADO HASTA EL MOMENTO 36,810 SEMILLAS M2 Y ENCONTRADO UNA LETALIDAD CERCANA AL 30% EN LOS PRESUNTOS DOBLES MUTANTES, COMO CABRIA ESPERAR PARA MUTACIONES QUE ALTERAN UN PROCESO TAN ESENCIAL PARA LA PLANTA, HEMOS IDENTIFICADO 15 LINEAS VIABLES Y FERTILES EN LAS QUE EL FENOTIPO AGO1-52 SE DEBILITA Y EN ALGUNOS CASOS SE ASEMEJA AL FENOTIPO DEL SILVESTRE Y SE MANTIENE EN LA GENERACION M3, TAMBIEN HEMOS IDENTIFICADO UNA LINEA CON UN FENOTIPO INESPERADO Y DIFERENTE AL DE AGO1-52 QUE HEMOS INTERPRETADO COMO UN CASO DE EPISTASIA EN LA QUE LA SEGUNDA MUTACION ENMASCARA EL FENOTIPO DE LAS PLANTAS AGO1-52, ESTAMOS OBTENIENDO LA F1 DE TODAS ESTAS LINEAS DE SUS CRUZAMIENTOS POR SU PARENTAL LER CON EL FIN DE DETERMINAR EL MODO DE HERENCIA DE LA SEGUNDA MUTACION, ASI COMO DE DETECTAR OTRAS MUTACIONES QUE PODRIAN CONTRIBUIR AL FENOTIPO OBSERVADO, HEMOS SELECCIONADO DOS LINEAS EN LAS QUE EL FENOTIPO DEL PARENTAL M2 REAPARECE EN LA GENERACION F2 DE FORMA ESTABLE Y EN PROPORCIONES QUE PODEMOS INTERPRETAR GENETICAMENTE, HEMOS INICIADO LA CARTOGRAFIA DE ESTAS DOS MUTACIONES SUPRESORAS, POR LO QUE HEMOS CRUZADO INDIVIDUOS M3 POR EL ECOTIPO COL Y POR UN ALELO VIABLE Y FERTIL DEL GEN AGO1 QUE SE ENCUENTRA TAMBIEN EN EL FONDO COL, PROPONEMOS CONTINUAR CON ESTE ABORDAJE GENETICO Y MOLECULAR A LA IDENTIFICACION DE NUEVOS ELEMENTOS DE LA RUTA DE LOS MIARN, IMPLICADOS EN EL DESARROLLO DE ARABIDOPSIS THALIANA, PRETENDEMOS(A) LA CLONACION POSICIONAL DE DOS DE ESTOS SUPRESORES ASI COMO LA CARACTERIZACION FUNCIONAL DE LOS GENES, Y (B) LA CARTOGRAFIA DE BAJA RESOLUCION DEL RESTO DE LAS MUTACIONES SUPRESORAS IDENTIFICADAS EN NUESTRO ESCRUTINIO, Arabidopsis\argonauta\microARN\mutant
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