Descripción del proyecto
LA PROTEINA ARGONAUTE1 (AGO1) ES EL PRINCIPAL EFECTOR DE LAS RUTAS DE SILENCIAMIENTO GENICO POSTRANSCRIPCIONAL (PTGS) MEDIADAS POR PEQUEÑOS ARN INTERFERENTES, INCLUIDA LA DE LOS MICROARN (MIARN), EN ARABIDOPSIS, LOS ALELOS HIPOMORFOS DEL GEN AGO1 PERTURBAN NUMEROSOS ASPECTOS DEL DESARROLLO Y LAS RESPUESTAS AL ESTRES BIOTICO Y ABIOTICO, Y LOS NULOS SON LETALES, LA GRAN CANTIDAD DE INFORMACION ACUMULADA SOBRE LOS MECANISMOS POR LOS QUE AGO1 REGULA POSTRANSCRIPCIONALMENTE LA EXPRESION DE OTROS GENES CONTRASTA CON LO POCO QUE SE HA ESTUDIADO SU PROPIA REGULACION TRANSCRIPCIONAL, AUNQUE LA EXPRESION DE AGO1 ES GENERALIZADA Y PRACTICAMENTE CONSTITUTIVA EN CONDICIONES NORMALES, SE INCREMENTA ANTE CIERTAS CONDICIONES AMBIENTALES, COMO LA INFECCION VIRAL, HEMOS ENCONTRADO EN EL PROMOTOR DE AGO1 ELEMENTOS REGULADORES RELACIONADOS CON LA RUTA DE RESPUESTA A PROTEINAS MAL PLEGADAS (UPR) EN EL RETICULO ENDOPLASMICO (RE), QUE SE ENCUENTRAN CONSERVADOS EN LOS PROMOTORES DE LOS ORTOLOGOS DE AGO1 DEL ARROZ Y BRASSICA RAPA, SUPONEMOS QUE ESTAS SECUENCIAS UPR PARTICIPAN EN EL CONTROL DE LA EXPRESION DEL GEN AGO1, MEDIANTE ENSAYOS DE UN HIBRIDO DE LEVADURA (Y1H) HEMOS IDENTIFICADO 4 FACTORES DE TRANSCRIPCION DE LA FAMILIA BZIP QUE SE UNEN AL PROMOTOR DE AGO1, EN UNA BUSQUEDA DE MODIFICADORES DEL FENOTIPO DE AGO1-52 UN ALELO HIPOMORFO DE AGO1 AISLADO EN NUESTRO LABORATORIO HEMOS IDENTIFICADO VARIOS GENES SUPRESORES Y CARACTERIZADO EN DETALLE UNO DE ELLOS, MAS2 (MORPHOLOGY OF ARGONAUTE1-52 SUPPRESSED 2), QUE HA RESULTADO SER UN GEN ESENCIAL Y MUY CONSERVADO, HEMOS DESCUBIERTO QUE LA PROTEINA MAS2 COLOCALIZA CON LOS GENES DE LOS ADN RIBOSOMICOS 45S (ADNR 45S) Y QUE LOS REPRIME EPIGENETICAMENTE, EN ENSAYOS DE DOBLE HIBRIDO DE LEVADURA (Y2H) HEMOS DETECTADO VARIAS PROTEINAS QUE INTERACTUAN CON MAS2, CUYAS ORTOLOGAS ANIMALES ESTAN IMPLICADAS EN EL PROCESAMIENTO DE LOS ADNR 45S Y EL ENSAMBLAJE DEL RIBOSOMA, HEMOS ESTABLECIDO QUE AGO1 TAMBIEN PARTICIPA EN LA REGULACION DE LA EXPRESION DE LOS ADNR 45S, HEMOS OBSERVADO INTERACCIONES SINERGICAS ENTRE ALELOS DE AGO1 Y DE GENES QUE REGULAN LA EXPRESION DE LOS ADNR 45S O QUE CODIFICAN PROTEINAS RIBOSOMICAS, ASI COMO CON LOS ALELOS INSERCIONALES DE GENES QUE CODIFICAN LOS INTERACTORES DE MAS2, PROPONEMOS CONTINUAR NUESTRO ANALISIS DE LA REGULACION DE LA EXPRESION DE AGO1, (1) CONFIRMAREMOS LA IDENTIDAD DE LOS FACTORES DE TRANSCRIPCION QUE SE UNEN IN VIVO AL PROMOTOR DE AGO1 Y DETERMINAREMOS LAS CONDICIONES Y LA NATURALEZA DE SU FUNCION REGULADORA, ESPERAMOS DESENTRAÑAR LA REGULACION TRANSCRIPCIONAL DE AGO1 Y SU RELEVANCIA EN EL PTGS, (2) ANALIZAREMOS EL PAPEL DE AGO1 Y DE OTROS GENES DE LA MAQUINARIA DE LOS MIARN (HST, DCL1, HYL1 O HEN1) EN LA REGULACION DE LA TRANSCRIPCION DE LOS ADNR Y EN LA BIOGENESIS DEL RIBOSOMA, ADEMAS, CARACTERIZAREMOS FUNCIONALMENTE TRES DE LOS INTERACTORES DE MAS2 QUE HEMOS IDENTIFICADO, QUE SON CANDIDATOS A PARTICIPAR EN LA REGULACION DE LA BIOGENESIS DEL RIBOSOMA, POR ULTIMO, (3) ESTUDIAREMOS LAS CONSECUENCIAS DE LA INSUFICIENCIA DE FUNCION DE MAS2 EN EL TRANSCRIPTOMA, YA QUE SOSPECHAMOS QUE ES UN GEN IMPORTANTE PARA LA REGULACION EPIGENETICA DE LA EXPRESION GENICA, Y PODRIA JUGAR UN PAPEL CENTRAL EN LA SALVAGUARDA DE LA INTEGRIDAD DEL GENOMA, ARABIDOPSIS\ARGONAUTE1\AGO1\SILENCIAMIENTO GÉNICO POSTRANSCRIPCIONAL\PTGS\UNFOLDED PROTEIN RESPONSE\UPR\RETÍCULO ENDOPLÁSMICO\MICROARN\ADNR 45S