Descripción del proyecto
LA AUXINA (ACIDO INDOL-3-ACETICO, IAA) ES UNA FITOHORMONA QUE REGULA LA DIVISION CELULAR EN LAS PLANTAS, ASI COMO OTROS PROCESOS LIGADOS AL DESARROLLO, UNO DE LOS ASPECTOS CLAVES EN LA SEÑALIZACION MOLECULAR DE LA AUXINA ES LA FORMACION DE GRADIENTES DE CONCENTRACION, QUE ACTIVAN PROGRAMAS ESPECIFICOS DE DESARROLLO A TRAVES DE LA TRANSCRIPCION DE DIFERENTES FAMILIAS DE FACTORES DE TRANSCRIPCION, LA FORMACION DE LOS GRADIENTES DE CONCENTRACION DEPENDE DEL TRANSPORTE LENTO, CELULA A CELULA, DE LA AUXINA, DIFERENTES FAMILIAS DE PROTEINAS TRANSPORTADORAS HAN SIDO IDENTIFICADAS, REVELANDO QUE AQUELLAS SE LOCALIZAN ASIMETRICAMENTE EN LA MEMBRANA PLASMATICA, DIRIGIENDO ASI LOS FLUJOS DE AUXINA, EN NUESTRO LABORATORIO HEMOS DEMOSTRADO QUE LA PROTEINA QUINASA CK2, TRADICIONALMENTE LIGADA A LA DIVISION CELULAR, TIENE UN PAPEL REGULADOR EN EL TRANSPORTE CELULA A CELULA DE LA AUXINA, LA ELIMINACION DE LA ACTIVIDAD CK2, POR MEDIOS GENETICOS Y FARMACOLOGICOS, PRODUCE LA DISRUPCION DE LOS GRADIENTES DE AUXINA, ASI COMO LA DESLOCALIZACION DE LOS TRANSPORTADORES DE MEMBRANA, ELLO SE ASOCIA A LA APARICION DE UN FENOTIPO SIMILAR AL DE LOS MUTANTES DEFICIENTES O INSENSIBLES A AUXINA, QUE, EN EL CASO DEL MUTANTE DE CK2, PUEDE SER RESCATADO POR ADICION DE AUXINA EXOGENA, BASANDONOS EN NUESTROS RESULTADOS, UNA DE NUESTRAS HIPOTESIS DE TRABAJO ES QUE PODRIA ESTAR AFECTADO EL TRAFICO INTRACELULAR DE VESICULAS ENDOSOMALES, QUE ES NECESARIO PARA LA LOCALIZACION POLAR DE LAS PROTEINAS TRANSPORTADORAS DE AUXINA EN LA MEMBRANA, SE REALIZARAN ESTUDIOS BIOQUIMICOS Y GENETICOS PARA DILUCIDAR ESTE PUNTO, ESTUDIANDOSE EN PROFUNDIDAD LA REGULACION TRANSCRIPCIONAL Y POST-TRANSCRIPCIONAL DE LOS TRASNPORTADORES DE AUXINA, EN PARTICULAR DE LAS PROTEINAS PIN, EN EL MUTANTE DE CK2, ADEMAS, SE CONSTRUIRA UN MUTANTE DE SOBREEXPRESION DE CK2 (CK2OE) COMO HERRAMIENTA ADICIONAL AL MUTANTE DE PERDIDA DE FUNCION QUE YA TENEMOS, EL USO COMBINADO DE ESTOS DOS MUTANTES, QUE ADEMAS SERAN CRUZADOS CON PLANTAS TRASNGENICAS QUE CONTIENEN DIVERSAS CONSTRUCCIONES DE INTERES Y CON MUTANTES RELACCIONADOS CON EL TRANSPORTE DE AUXINA, NOS PERMITIRA ANALIZAR LA FUNCION DE LA CK2 EN PROFUNDIDAD, FINALMENTE, UTILIZAREMOS LAS PLANTAS TRASNGENICAS DE SOBREXPRESION, QUE CONTENDRAN UN EPITOPO PARA INMUNODETECCION EN LA ZONA CODIFICANTE DE CK2, PARA CARACTERIZAR SUSTRATOS DE LA CK2, SE REALIZARAN ENSAYOS DE INMUNOPRECIPITACION Y OTRAS TENICAS QUE PERMITEN AISLAR COMPLEJOS PROTEICOS, PARA DESPUES ANALIZARLOS POR TECNICAS DE PROTEOMICA,