Descripción del proyecto
LOS EXOPOLISACARIDOS (EPS) PRODUCIDOS POR BACTERIAS LACTICAS (BAL) DESEMPEÑAN UNA IMPORTANTE FUNCION A LA HORA DE CONFERIR VISCOSIDAD Y TEXTURA ADECUADAS A LOS PRODUCTOS LACTEOS FERMENTADOS, SIENDO SU MASA MOLAR Y COMPOSICION QUIMICA LOS PARAMETROS IMPLICADOS EN ESTA FUNCION, EN LOS ULTIMOS AÑOS, LOS EPS DE BAL ESTAN SIENDO OBJETO DE UN RENOVADO INTERES DADO SU POSIBLE EFECTO POSITIVO SOBRE LA SALUD, LOS ESCASOS ESTUDIOS CITADOS EN LA BIBLIOGRAFIA SE REFIEREN A LA BUSQUEDA DE EPS CON POTENCIALES EFECTOS BENEFICIOSOS, PERO EXISTE UNA CARENCIA DE ESTUDIOS A CERCA DE LOS MECANISMOS DE ACTUACION DE ESTOS BIOPOLIMEROS, LA HIPOTESIS PRINCIPAL DE ESTE PROYECTO ES QUE LAS CARACTERISTICAS FISICO-QUIMICAS DE LOS EPS DEBERIAN DE ESTAR DIRECTAMENTE CORRELACIONADAS CON SU POSIBLE CAPACIDAD INMUNOMODULADORA, PARA LLEVAR A CABO ESTE ESTUDIO HEMOS ELEGIDO COMO MODELO TRES CEPAS DE BIFIDOBACTERIUM ANIMALIS SUBSP, LACTIS PRODUCTORAS DE EPS ESTRECHAMENTE RELACIONADAS ENTRE SI: A1 (PARENTAL) Y SUS CEPAS ADAPTADAS A BILIS A1DOX Y A1DOXR (CEPA ¿ROPY¿), LAS CUALES HAN SIDO OBTENIDAS EN NUESTRO LABORATORIO POR EXPOSICION A CONCENTRACIONES CRECIENTES DE SALES BILIARES, PARA RESPONDER A LA HIPOTESIS PLANTEADA, PROPONEMOS LOS SIGUIENTES OBJETIVOS GENERALES:(I) SECUENCIAR EL GENOMA DE LAS TRES CEPAS PARA ESTABLECER CUALES SON LAS MUTACIONES PERMANENTES PRODUCIDAS POR LA ADQUISICION DEL FENOTIPO DE RESISTENCIA A BILIS,(II) ESTUDIAR EL PERFIL DE EXPRESION GENICA, ESPECIALMENTE DE LOS GENES IMPLICADOS EN LA SINTESIS DE EPS, MEDIANTE TRANSCRIPTOMICA (MICROARRAYS Y RT-PCR CUANTITATIVA) Y ANALIZAR LA INFLUENCIA DEL RATIO CARBONO/NITROGENO EN LA APARICION DEL FENOTIPO EPS ¿ROPY¿ EN LA CEPA A1DOXR,(III) ANALIZAR LAS CARACTERISTICAS FISICO-QUIMICAS DE LOS EPS PURIFICADOS EMPLEANDO, ENTRE OTRAS, TECNICAS DE NMR PARA ESTABLECER UNA CORRELACION ENTRE LOS PARAMETROS INTRINSICOS DE LOS EPS Y SU POTENCIAL INMUNOMODULADOR Y/O TECNOLOGICO,(IV) DETERMINAR LA RESPUESTA INMUNE (A NIVEL SISTEMICO Y DE MUCOSA INTESTINAL) DE DISTINTOS EPS PURIFICADOS SOBRE MONOCITOS, CELULAS DENDRITICAS Y LINFOCITOS T VIRGENES AISLADOS DE CELULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERIFERICA (PBMC) Y SOBRE CULTIVOS PRIMARIOS DE CELULAS ASILADAS DEL TEJIDO LINFOIDE ASOCIADO AL INTESTINO (GALT), SE DETERMINARA LA PROLIFERACION DE LAS DISTINTAS POBLACIONES CELULARES Y EL PATRON DE PRODUCCION DE CITOCINAS (TH1, TH2, TH17 Y TGF-BETA), (V) ANALIZAR LAS PROPIEDADES TECNOLOGICAS EN SOLUCION ACUOSA DE EPS CON CAPACIDAD INMUNOMODULADORA,ESPERAMOS QUE LOS RESULTADOS OBTENIDOS DE ESTE PROYECTO NOS PERMITAN PROPONER CUALES SON LOS PARAMETROS INTRINSECOS A LOS EPS QUE ACTUAN COMO MOLECULAS SEÑAL PARA INDUCIR LA RESPUESTA INMUNE, BIFIDOBACTERIUM\EXOPOLISACARIDOS\TRANSCRIPTOMICA\MICROARRAY\CARACTERIZACION NMR\INMUNIDAD\PBMC\CELULAS DENDRITICAS\CITOCINAS\GALT