Descripción del proyecto
LA MAYOR PARTE DE LAS CEPAS DE S, CEREVISIAE LLEVAN VIRUS CON GENOMA RNA PERTENECIENTES A DOS FAMILIAS: NARNAVIRIDAE O TOTIVIRIDAE, LOS NARNAVIRUS 20S RNA Y 23S RNA INFECTAN DE FORMA PERSISTENTE LA LEVADURA, SUS GENOMAS SON RNAS DE PEQUEÑO TAMAÑO Y POLARIDAD POSITIVA (2,5-3 KB) Y CODIFICAN UNICAMENTE PARA SU RNA POLIMERASA, NO ESTAN ENCAPSIDADOS EN VIRIONES, SI NO FORMANDO COMPLEJOS RIBONUCLEOPROTEICOS CON LA POLIMERASA, HEMOS ESTABLECIDO EN NUESTRO LABORATORIO SISTEMAS DE GENERACION DE ESTOS VIRUS A PARTIR DE SUS CDNAS CLONADOS EN VECTORES DE EXPRESION, ESTO NOS PERMITE ANALIZAR LOS MECHANISMOS DE REPLICACION MEDIANTE GENETICA REVERSA, EN AMBOS NARNAVIRUS EXISTEN PROXIMAS A LOS EXTREMOS 3¿ DE LAS CADENAS (+) SEÑALES EN CIS IMPORTANTES EN REPLICACION, EN ESTE PROYECTO NOS PROPONEMOS CONTINUAR EL ESTUDIO DETALLADO DE LAS MISMAS INICIADO EN PROYECTOS ANTERIORES; CENTRANDONOS EN EL PAPEL QUE JUEGA LA UNION DE LA POLIMERASA A DICHOS EXTREMOS EN LA PROTECCION CONTRA EXONUCLEASAS CELULARES, TAMBIEN ABORDAREMOS EL ESTUDIO DE GENES DE S, CEREVISIAE CUYA ACTIVIDAD ESTA ALTERADA POR LA PRESENCIA DE NARNAVIRUS, DATOS PRELIMINARES CON ARRAYS GENOMICOS INDICAN QUE PODRIA HABER ALREDEDOR DE 40-50, A DIFERENCIA DE LOS NARNAVIRUS, EL VIRUS L-A PERTENECIENTE A LOS TOTIVIRUS, TIENE UN GENOMA DE RNA BICATENARIO ENCAPSIDADO EN VIRIONES, EL TAMAÑO DEL GENOMA ES DE 4,6 KB Y SE CONOCEN BIEN LOS MECANISMOS DE TRANSCRIPCION, REPLICACION Y ENCAPSIDACION, UN ASPECTO NO SUFUCIENTEMENTE CONOCIDO, SIN EMBARGO, ES LA ESTABILIDAD DE LOS TRANSCRITOS VIRALES UNA VEZ QUE SALEN DEL VIRION PARA SER TRADUCIDOS Y ENCAPSIDADOS DURANTE LA FORMACION DE UN NUEVO VIRUS, ASI COMO EL PAPEL QUE DESEMPEÑAN LOS EXTREMOS 5¿ EN DICHA ESTABILIDAD (Y/O EN SU TRADUCCION) YA QUE NO LLEVAN GRUPOS CAP, UNA PARTE IMPORTANTE DEL PROYECTO SE CENTRARIA EN EL ANALISIS DE LOS EXTREMOS 5¿ TANTO EN L-A COMO EN LOS NARNAVIRUS, TENEMOS EVIDENCIA DE QUE AL MENOS EN L-A ESTOS SON DIFOSFATO, DADO QUE TANTO 20S RNA COMO 23S RNA, O L-A SON PARASITOS INTRACELULARES OBLIGATORIOS, DEBEN DE HABER DESARROLLADO ESTRATEGIAS QUE LOS HAGAN INVISIBLES A LOS MECANISMOS DE VIGILANCIA CELULAR, UNA DE ESTAS ESTRATEGIAS PUEDE SER LA MODIFICACION ESPECIFICA DE SUS EXTREMOS 5¿,