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PGC2018-093947-B-I00

Financiado

EL VIRUS L-A DE S. CEREVISIAE COMO MODELO DE REPLICACION VIRAL: INTERACCIONES CO...

EL VIRUS L-A DE S. CEREVISIAE COMO MODELO DE REPLICACION VIRAL: INTERACCIONES CON EL HOSPEDADOR Y RELACION CON LOS RNAS M PRODUCTORES DE TOXINAS KILLER EL VIRUS L-A DE S, CEREVISIAE TIENE UN GENOMA DSRNA DE 4,6 KB ENCAPSIDADO EN VIRIONES, QUE SE LOCALIZAN EN EL CITOPLASMA DE ESTA LEVADURA Y EN OTRAS ESPECIES DE S, SENSU STRICTO, ESTE VIRUS, CON VARIANTES EN SU SECUENCIA DE NUCLEO... ver más

01/01/2018

CSIC

104K€

Presupuesto del proyecto: 104K€

Líder del proyecto

AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA... No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 2-3 | 552M€

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2018-01-01

0% 100%

Participantes

CSIC

Lider

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Líder del proyecto

AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA...

TRL 2-3 | 552M€

Presupuesto del proyecto 104K€

Descripción del proyecto EL VIRUS L-A DE S, CEREVISIAE TIENE UN GENOMA DSRNA DE 4,6 KB ENCAPSIDADO EN VIRIONES, QUE SE LOCALIZAN EN EL CITOPLASMA DE ESTA LEVADURA Y EN OTRAS ESPECIES DE S, SENSU STRICTO, ESTE VIRUS, CON VARIANTES EN SU SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS QUE LLEGAN A ALCANZAR HASTA UN 30%, FUNCIONA COMO VIRUS "HELPER" DE RNAS SATELITES PRODUCTORES DE TOXINAS KILLER, DENOMINADOS GENERICAMENTE M, LA PRIMERA TOXINA DESCRITA FUE LA K1 EN 1963, EN LA ACTUALIDAD AL MENOS SIETE TOXINAS KILLER ESTAN INDENTIFICADAS, TANTO EN S, CEREVISIAE COMO EN S, PARADOXUS, LAS ULTIMAS CUATRO HAN SIDO SECUENCIADAS EN NUESTRO GRUPO, DE ELLAS, K21 Y K74 SON LAS MAS INTERESANTES Y SERAN ESTUDIADAS EN ESTE PROYECTO,EL VIRUS L-A HA SIDO UTILIZADO COMO MODELO DE REPLICACION DE VIRUS CON GENOMA RNA POR SU SIMPLICIDAD, YA QUE CODIFICA UNICAMENTE DOS PROTEINAS, GAG Y POL Y ES FACIL DE MANIPULAR TANTO IN VITRO (CON VIRIONES PURIFICADOS) COMO IN VIVO, UTILIZANDO MUTANTES DE LEVADURA AFECTADOS EN SU MANTENIMIENTO, UN NUEVO MECANISMO DE "CAP-SNATCHING" PARA PROVEER A LOS MRNAS VIRALES DE GRUPOS 5-CAP, HA SIDO CARACTERIZADO EN NUESTRO GRUPO EN LOS ULTIMOS AÑOS, PARA LOS ESTUDIOS DE REPLICACION IN VITRO HEMOS USADO EL MUTANTE DE DELECION DE L-A DENOMINADO X (530 BP, UN 12% DEL GENOMA PARENTAL) QUE MANTIENE LAS SECUENCIAS 5' Y 3' DE L-A IMPORTANTES EN REPLICACION, LOS ESTUDIOS IN VIVO, SIN EMBARGO, HAN SIDO IMPOSIBLES AL NO CONSEGUIR GENERAR EL VIRUS L-A A PARTIR DE SU CDNA CLONADO EN VECTORES DE EXPRESION, RECIENTEMENTE, SIGUIENDO UNA APROXIMACION EXPERIMENTAL DISTINTA, HEMOS PODIDO GENERAR POBLACIONES DEL VIRUS X O BIEN DE GENES REPORTER FLANQUEADOS POR LOS EXTREMOS DE X, QUE DEPENDEN DEL VIRUS L-A, POR EJEMPLO EL GEN DE RESISTENCIA A GENETICINA (GENR) O GENES QUE COMPLEMENTAN AUXOTROFIAS Y QUE FACILITAN LA SELECCION DE LOS NUEVOS VIRUS AL TENER FENOTIPOS IDENTIFICABLES, ESTE PROYECTO PRETENDE PROFUNDIZAR EN LA UTILIZACION DE ESTOS VIRUS QUIMERICOS PARA DOS TIPOS DE ANALISIS, 1) ESTUDIAR IN VIVO LAS SEÑALES IN CIS IMPORTANTES EN EL MANTENIMIENTO DE X (Y CONSECUENTEMENTE DE L-A) Y 2) SECUNDARIAMENTE EXPLORAR LA POSIBILIDAD DE UTILIZAR ESTE SISTEMA COMO UN MODO DE EXPRESION DE GENES HETEROLOGOS O RNAS DE INTERES, QUE ESTARIAN AMPLIFICADOS POR L-A, OTRO ASPECTO A ABORDAR EN EL PROYECTO ES EL ANALISIS DE RNAS CELULARES ENCAPSIDADOS EN VIRIONES DE L-A, MEDIANTE LA SECUENCIACION MASIVA CON ILLUMINA, ESTAS POBLACIONES NUNCA HA SIDO ANALIZADAS Y PREVISIBLEMENTE PUEDEN CONTENER RNAS RECOMBINANTES CON SECUENCIAS DE MRNAS DEL HOSPEDADOR Y SECUENCIAS VIRALES, LA INFORMACION TENDRIA IMPLICACIONES EVOLUTIVAS SOBRE EL ORIGEN DE LOS VIRUS SATELITE M RESPONSABLES DE LAS TOXINAS KILLER ,UN ULTIMO ASPECTO ES EL ESTUDIO DE DOS NUEVAS TOXINAS KILLER (K21 Y K74), ESTAS TOXINAS ORIGINARIAMENTE DE S, PARADOXUS SE EXPRESAN BIEN EN S, CEREVISIAE: BIEN A PARTIR DE VIRIONES INTRODUCIDOS EN ESA LEVADURA POR TECNICAS DE GENETICA CLASICA, O UTILIZANDO VECTORES DE EXPRESION CONSTRUIDOS DURANTE EL PROYECTO VIGENTE, PRETENDEMOS SU CARACTERIZACION EN MAS DETALLE, PURIFICANDOLAS A PARTIR DE CEPAS SUPERKILLER DE S, CEREVISAE O MEDIANTE EL SISTEMA DE EXPRESION COMERCIAL DE PICHIA PASTORIS, ESTAS TOXINAS SE UNIRIAN ASI A LA BATERIA DE TOXINAS KILLER CONOCIDAS, CON POSIBLE APLICACIONES TANTO CLINICAS (K21 ES ACTIVA SOBRE LA LEVADURA CANDIDA) COMO ALIMENTARIAS (EN LOS PROCESOS DE FERMENTACION VINICA O EN LA PRODUCCION DE MASAS MADRE PARA PAN), VIRUS RNA\LEVADURA\SACCHAROMYCES CEREVISIAE\REPLICACIÓN\TOXINAS "KILLER"

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