Descripción del proyecto
EN ESTE PROYECTO SE PROPONE LA SECUENCIACION COMPLETA DEL GENOMIO DE SINORHIZOBIUM FREDII HH103, CREEMOS QUE ESTA PROPUESTA ES DE INTERES PORQUE SERIA LA PRIMERA SECUENCIA COMPLETA DEL GENOMIO DE UN RIZOBIO DE CRECIMIENTO RAPIDO Y CON UN RANGO DE NODULACION MUY AMPLIO (QUE INCLUYE LA SOJA), ADEMAS PERMITIRIA LOS SIGUIENTES OBJETIVOS:A) PROFUNDIZAR EN NUESTROS ESTUDIOS SOBRE LA PRODUCCION Y REGULACION DE LAS DIVERSAS SEÑALES SIMBIOTICAS DE ESTE RIZOBIO,B) LLEVAR A CABO ESTUDIOS COMPARATIVOS CON LOS GENOMIOS DE OTROS RIZOBIOS, ESPECIALMENTE CON EL DE S, MELILOTI 1021, (EL RIZOBIO MEJOR CONOCIDO GENETICAMENTE, MUY CERCANO FILOGENETICAMENTE A S, FREDII, PERO DE RANGO ESTRECHO DE NODULACION Y QUE NO NODULA EN LA SOJA), ES ESPERABLE QUE, DADO QUE ESTOS DOS RIZOBIOS TIENEN UN RANGO DE NODULACION MUY DIFERENTE, PODAMOS ENCONTRAR AMPLIAS DIFERENCIAS EN LOS GRUPOS GENICOS RESPONSABLES DE LA SINTESIS DE SEÑALES SIMBIOTICAS Y EN LA REGULACION DE LA PRODUCCION DE DICHAS SEÑALES,C) REALIZAR POR PRIMERA VEZ ESTUDIOS DE PROTEOMICA EN S, FREDII,ESTE PROYECTO SUPONE ADEMAS LA CONTINUIDAD CON DOS PROYECTOS ANTERIORES DE LOS DOS GRUPOS SOLICITANTES (UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MADRID Y UNIVERSIDAD DE SEVILLA) DONDE HEMOS ESTUDIADO EL PAPEL SIMBIOTICO DE LOS POLISACARIDOS SUPERFICIALES RIZOBIANOS (PSR) Y LA IMPORTANCIA DEL BORO EN EL PROCESO DE NODULACION, ASI:A) SE PROFUNDIZARA EN EL ESTUDIO DE LA REGULACION DE LA PRODUCCION DE LOS PSR DE S, FREDII, SE MUTAGENIZARAN DOS POSIBLES GENES REGULADORES, GREA Y SMC04882, SITUADOS RESPECTIVAMENTE JUNTO A GENES IMPLICADOS EN LA SINTESIS DEL LIPOPOLISACARIDO Y DE LOS GLUCANOS CICLICOS, ESTOS GENES ESTAN TAMBIEN PRESENTES EN LA MISMA UBICACION EN S, MELILOTI, ADEMAS SE ABORDARA EL ESTUDIO GENETICO DE LOS EFECTOS, REPRESOR E INDUCTOR RESPECTIVAMENTE, QUE LOS REGULADORES SIMBIOTICOS NODD Y NOLR TIENEN SOBRE LA PRODUCCION DEL EXOPOLISACARIDO (EPS) DE S, FREDII HH103, B) EN NUESTROS ESTUDIOS HEMOS ENCONTRADO QUE UN MUTANTE EXOA DE S, FREDII HH103 (INCAPAZ DE PRODUCIR EPS) NO REQUIERE LA PRESENCIA DE FLAVONOIDES PARA SECRETAR NOPS (NODULATION OUTER PROTEINS) A TRAVES DE UN SISTEMA DE SECRECION DE TIPO III, SE INVESTIGARA SI ESTA SECRECION CONSTITUTIVA DE NOPS, NUNCA ANTES OBSERVADA EN UN RIZOBIO, AUN REQUIERE LA PARTICIPACION DE LOS GENES REGULADORES NODD1 Y TTSI,C) SE INICIARA EL ESTUDIO DE LA CAPACIDAD FORMADORA DE BIOPELICULAS (BIOFILMS) EN S, FREDII Y EN S, MELILOTI, ESTUDIOS RECIENTES REVELAN LA IMPLICACION EN ESTE PROCESO DE LOS FACTORES DE NODULACION, INVESTIGAREMOS EL POSIBLE PAPEL EN LA FORMACION DE BIOFILMS DE UN GRUPO MUY DIVERSO DE GENES DE S, FREDII IMPLICADOS EN LA PRODUCCION DE SEÑALES SIMBIOTICAS (FACTORES NOD, NOPS, PSR; SE DISPONE DE UNA AMPLIA BATERIA DE MUTANTES), ADEMAS SE BUSCARAN (Y MUTARAN) GENES REGULADORES DE LOS NIVELES DE BIS-(2¿,5¿)-MONOFOSFATO DE GUANOSINA CICLICO (C-DI-GMP), UN SEGUNDO MENSAJERO BACTERIANO IMPLICADO EN LA FORMACION DE BIOFILMS,D) SE CONTINUARA EL ESTUDIO DEL BORO COMO AGENTE MODULADOR DE LAS INTERACCIONES DE GLUCOPROTEINAS VEGETALES CON LOS PSR BACTERIANOS EN LAS SIMBIOSIS S, MELILOTI-ALFALFA Y S, FREDII-SOJA, SE INVESTIGARA LA PRESENCIA DE GLUCOPROTEINAS VEGETALES CON SITIOS DE UNION A B DURANTE DISTINTAS ETAPAS DEL DESARROLLO DEL NODULO Y SU POSIBLE INTERACCION CON LOS PSR BACTERIANOS, EN CASO POSITIVO, SE ESTUDIARA SI DICHA INTERACCION ESTA RELACIONADA CON LA ESENCIALIDAD O NO DEL POLISACARIDO BACTERIANO PARA EL DESARROLLO DEL NODULO, Fijación de N2\simbiosis rizobio-leguminosas\genomio\polisacáridos superficiales rizobianos\genes reguladores\biopelículas\boro\glycoproteínas vegetales\Nops.