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BFU2009-11751

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RELACION ESTRUCTURA-FUNCION EN LAS PROTEINAS DE LA ENVOLTURA DEL VIRUS DE HEPATI...

RELACION ESTRUCTURA-FUNCION EN LAS PROTEINAS DE LA ENVOLTURA DEL VIRUS DE HEPATITIS C LAS PROTEINAS E1 Y E2 DE LA ENVOLTURA DEL VIRUS DE HEPATITIS C DEBEN JUGAR UN PAPEL DETERMINANTE EN LAS PRIMERAS ETAPAS DEL CICLO INFECTIVO DEL HCV, CON OBJETO DE APORTAR NUEVOS DATOS ACERCA DE LA BIOLOGIA DEL VIRUS, SE PLANTEAN L... ver más

01/01/2009

UCM

48K€

Presupuesto del proyecto: 48K€

Líder del proyecto

Universidad Complutense de Madrid No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

Total investigadores 3279

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2009-01-01 No tenemos la información de la convocatoria

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Líder del proyecto

Universidad Complutense de Madrid No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

Total investigadores 3279

Presupuesto del proyecto 48K€

Descripción del proyecto LAS PROTEINAS E1 Y E2 DE LA ENVOLTURA DEL VIRUS DE HEPATITIS C DEBEN JUGAR UN PAPEL DETERMINANTE EN LAS PRIMERAS ETAPAS DEL CICLO INFECTIVO DEL HCV, CON OBJETO DE APORTAR NUEVOS DATOS ACERCA DE LA BIOLOGIA DEL VIRUS, SE PLANTEAN LOS SIGUIENTES OBJETIVOS: 1) EXPRESION Y AISLAMIENTO DE DIFERENTES FORMAS RECOMBINANTES DE LAS PROTEINAS E1 Y E2, EL SISTEMA DE EXPRESION QUE SE VA A UTILIZAR ES EL DE BACULOVIRUS/CELULAS DE INSECTO, LAS FORMAS PROTEICAS QUE SE PRETENDEN CONSTRUIR SE DIVIDEN EN DOS GRUPOS: A) POLIPEPTIDOS DERIVADOS DEL ECTODOMINIO E2661, LOS MUTANTES DE DELECION DE E2661 PERMITIRAN LOCALIZAR LAS ZONAS RESPONSABLES DE LAS PROPIEDADES DE INTERACCION Y FUSION, TAMBIEN SE CONSTRUIRAN MUTANTES DE REGIONES QUE SE HAN PROPUESTO IMPORTANTES EN LA UNION A RECEPTORES, B) POLIPEPTIDOS DERIVADOS DE QUIMERAS E1E2, CON ELLOS SE PRETENDE DETERMINAR EL FRAGMENTO DE E2 MINIMO NECESARIO PARA QUE E1 ADQUIERA UNA ESTRUCTURA NATIVA, COMO EN TODOS LOS CASOS LOS ECTODOMINIOS ESTARAN UNIDOS ENTRE SI POR UNA SECUENCIA DE RECONOCIMIENTO DE PROTEASA (TEV O ENTEROQUINASA), CABE ESPERAR QUE PODAMOS OBTENER CORRECTAMENTE PLEGADO EL ECTODOMINIO DE E1, 2) ESTUDIOS MOLECULARES, LA OBTENCION DE LAS PROTEINAS RECOMBINANTES EN CANTIDAD SUFICIENTE PERMITIRA LLEVAR A CABO DIVERSOS ESTUDIOS MOLECULARES, EN CONCRETO, CON LAS DIFERENTES FORMAS PROTEICAS SE PROCEDERA A: A) LA CARACTERIZACION ESTRUCTURAL, LOS ESTUDIOS DE ESPECTROSCOPIA DE DICROISMO CIRCULAR Y DE FLUORESCENCIA APORTARAN DATOS ACERCA DE LAS ESTRUCTURAS SECUNDARIA Y TERCIARIA, RESPECTIVAMENTE, LA CARACTERIZACION MOLECULAR SE COMPLETARA CON LA DETERMINACION DE LOS RESTOS DE HIDRATO DE CARBONO Y EL PATRON DE PUENTES DISULFURO, B) ANALIZAR SU CAPACIDAD DE INTERACCION Y DESESTABILIZACION DE VESICULAS DE FOSFOLIPIDOS, SE EMPLEARAN DISTINTOS ENSAYOS QUE APORTAN EVIDENCIAS ACERCA DE LOS CAMBIOS QUE SE PRODUCEN TANTO EN LA PROTEINA COMO EN EL FOSFOLIPIDO COMO CONSECUENCIA DE LA INTERACCION ENTRE AMBOS ASI COMO DE LA EXISTENCIA DE AGREGACION, DE MEZCLA DE LIPIDOS Y DE LIBERACION DE CONTENIDOS ACUOSOS, 3) ESTUDIOS CELULARES, CON LAS PROTEINAS RECOMBINANTES SE LLEVARAN A CABO LOS SIGUIENTES ESTUDIOS: A) IDENTIFICACION DE LAS MOLECULAS RESPONSABLES DE LA UNION DE HCV A LOS HEPATOCITOS, PARA ELLO SE UTILIZARA, PREFERENTEMENTE, LA LINEA CELULAR DE HEPATOMA HUH-7, SUSCEPTIBLE DE SER INFECTADA POR HCV, ASI COMO OTRAS LINEAS CELULARES HUMANAS DE ORIGEN NO HEPATICO QUE PUEDAN APORTAR DATOS ACERCA DE LA ESPECIFICIDAD DE LA INTERACCION, B) ESTUDIO DEL MECANISMO DE ENTRADA DEL VIRUS EN LA CELULA, LA UTILIZACION DE ANTICUERPOS FRENTE A E1 Y E2 PERMITIRA LOCALIZAR LAS PROTEINAS UNA VEZ QUE SON INTERNADAS EN LA CELULA, ADEMAS, LA INHIBICION DE LOS DIFERENTES MECANISMOS DE ENDOCITOSIS DESCRITOS HASTA LA FECHA MEDIANTE AGENTES QUIMICOS PERMITIRA DETERMINAR CUAL O CUALES DE ESTOS MECANISMOS SON EMPLEADOS POR EL HCV PARA ENTRAR EN LA CELULA, C) IMPLICACION DE DISTINTAS PROTEINAS DE LA SUPERFICIE DEL HCV EN LA INDUCCION DE APOPTOSIS, ACTIVACION Y PRODUCCION DE INTERLEUQUINAS, ESTOS ESTUDIOS SE LLEVARAN A CABO CON LAS CELULAS SRD10 TRANSFECTADAS CON UN PLASMIDO RECOMBINANTE QUE EXPRESA EL RECEPTOR CD81 HUMANO PARA QUE TENGAN CAPACIDAD DE INTERACCIONAR CON LAS PROTEINAS DE ENVUELTA DE HCV, UNA VEZ PUESTA A PUNTO LA NUEVA LINEA SRD10-CD81H, DISPONDREMOS DE UN SISTEMA MURINO CON TODOS LOS RECEPTORES DE RATON MAS CD81 HUMANO QUE NOS PERMITA CARACTERIZAR LA RESPUESTA INMUNE TRAS TRATAR LAS DIFERENTES PROTEINAS RECOMBINANTES, HEPATITIS C\PROTEINAS DE LA ENVOLTURA\FUSION DE MEMBRANAS\PROTEINAS E1 Y E2

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