Descripción del proyecto
LA NECROSIS NERVIOSA VIRAL (NNV) ES UNA ENFERMEDAD QUE AFECTA A GRAN VARIEDAD DE PECES EN TODO EL MUNDO, CAUSANDO ELEVADAS TASAS DE MORTALIDAD, SOBRE TODO EN LARVAS Y JUVENILES, LOS AGENTES ETIOLOLOGICOS DE LA ENFERMEDAD SON LOS BETANODAVIRUS, QUE POSEEN UN GENOMA RNA MONOCATENARIO BISEGMENTADO COMPUESTO POR EL RNA1, QUE CODIFICA LA POLIMERASA VIRAL, Y EL RNA2, QUE CODIFICA LA PROTEINA DE LA CAPSIDE, ADEMAS, SINTETIZAN UN RNA SUBGENOMICO, RNA3, QUE CODIFICA LAS PROTEINAS B1 (FACTOR ANTI-NECROTICO) Y B2 (PROTECCION DE LA REPLICACION VIRAL FRENTE A RNA INTERFERENTES CELULARES), LOS BETANODAVIRUS SE CLASIFICAN EN 4 GENOTIPOS SEGUN LA SECUENCIA T4 DEL RNA2: SJNNV, TPNNV, BFNNV Y RGNNV, SIN EMBARGO EN LOS ULTIMOS AÑOS SE DOCUMENTADO EL AISLAMIENTO DE RECOMBINANTES NATURALES RG/SJ (RNA1 TIPO RGNNV Y RNA2 SJNNV) EN EL SUR DE EUROPA, TODOS LOS RECOMBINATES AISLADOS DE LENGUADO Y DORADA CULTIVADOS EN LA PENINSULA IBERICA TIENEN UNA PROTEINA DE LA CAPSIDE CON 3 POSICIONES AMINOACIDICAS DIFERENTES RESPECTO A LA DE SJNNV, 2 DE ELLAS EN EL EXTREMO C-TERMINAL, REGION DETERMINANTE DE ESPECIFICIDAD DE HOSPEDADOR, QUE SE HA DEMOSTRADO JUEGAN UN PAPEL IMPORTANTE EN LA VIRULENCIA, Y UNA EN LA REGION N-TERMINAL, ASIMISMO, ESTOS RECOMBINANTES PRESENTAN EN LA POLIMERASA 19 RESIDUOS AMIOACIDICOS DIFERENTES CON RESPECTO A LA POLIMERASA DE LA CEPA TIPO RG Y EN LAS REGIONES NO CODIFICANTES DE AMBOS SEGMENTOS GENOMICOS UN TOTAL DE 4 NUCLEOTIDOS QUE NO COINCIDEN CON LAS CEPAS TIPO RGNNV (RNA1) Y SJNNV (RNA2), TODOS ESTOS CAMBIOS PUEDEN DESEMPEÑAR UN PAPEL IMPORTANTE EN LA VIRULENCIA Y EN LA CAPACIDAD REPLICATIVA, EL ESTUDIO DE LOS DETERMINANTES DE VIRULENCIA Y DE LA CAPACIDAD REPLICATIVA (RELACIONADA ADEMAS DE CON LA POLIMERASA CON LOS ORF B1 Y B2) ES FUNDAMENTAL PARA ENTENDER Y CONTROLAR LA ENFERMEDAD, ASPECTOS QUE SERAN ABORDADOS POR EL EQUIPO DE INVESTIGACION DE LA USC, PERO ES BIEN SABIDO QUE EL DESARROLLO DE LA ENFERMEDAD NO DEPENDE SOLO DEL PATOGENO, ESTANDO DETERMINADO POR LA INTERACCION VIRUS-HOSPEDADOR, LA IMPLICACION DEL HOSPEDADOR ESTA BASADA EN LA ESTIMULACION DEL SISTEMA INMUNE, QUE SERA CARACTERIZADO POR EL EQUIPO DE INVESTIGACION DE LA UMA, LA INFECCION VIRICA INDUCE LA ACTIVACION TANTO DEL SISTEMA INMUNE INNATO COMO DEL ADAPTATIVO, LOS ESTUDIOS SOBRE LA ACTIVACION DEL SISTEMA INMUNE QUE SE LLEVARAN A CABO INCLUYEN LA REALIZACION DE UNA SECUENCIACION MASIVA TRANSCRIPTOMICA (RNA-SEQ) EN RESPUESTA A INFECCIONES POR VIRUS DE DISTINTA VIRULENCIA PARA LENGUADO, ESTE ESTUDIO GENERARA UNA INFORMACION VALIOSISIMA SOBRE LOS INMUNOGENES IMPLICADOS EN RUTAS DE DEFENSA ANTIVIRICAS, AL TIEMPO QUE PERMITIRA EL DISEÑO DE OPENARRAYS BASADOS EN PCR A TIEMPO REAL CON SONDAS TAQMAN QUE SE UTILIZARAN PARA ESTUDIAR, A NIVEL DE EXPESION GENICA, LA RESPUESTA DEL SISTEMA INMUNE DE LENGUADO FRENTE A VIRUS RECOMBINANTES, OBTENIDOS POR GENETICA INVERSA, CON DISTINTO GRADO DE VIRULENCIA Y CAPACIDAD REPLICATIVA,ATENDIENDO A ESTA HIPOTESIS, EL OBJETIVO PRINCIPAL DEL PRESENTE PROYECTO ES ANALIZAR LOS FACTORES IMPLICADOS EN LA VIRULENCIA Y LA CAPACIDAD REPLICATIVA DE BETANODAVIRUS EN LENGUADO Y SU RELACION CON LA RESPUESTA INMUNE DEL HOSPEDADOR, BETANODAVIRUS\LENGUADO\DETERMINANTES DE VIRULENCIA Y REPLICACIÓ\GENÉTICA INVERSA\SISTEMA INMUNE\RNA-SEQ\OPENARRAYS