Descripción del proyecto
LA RETINOPATIA Y ENCEFALOPATIA VIRAL (ERV) ES UNA DE LAS ENFERMEDADES VIRALES DE PECES MAS PREOCUPANTES PARA LA ACUICULTURA MARINA DEL SUR DE EUROPA, LOS AGENTES ETIOLOGICOS SON LOS VIRUS DE LA NECROSIS NERVIOSA VIRAL (VNN), PERTENECIENTES AL G, BETANODAVIRUS, ESTOS VIRUS TIENEN UN GENOMA MONOCATENAL BISEGMENTADO FORMADO POR RNA1 Y RNA2, QUE CODIFICAN REPLICASA VIRAL Y PROTEINA DE LA CAPSIDE, RESPECTIVAMENTE, ADEMAS, SINTETIZAN UN ARN SUBGENOMICO, ARN3, A PARTIR DEL EXTREMO 3 DEL ARN1, LOS BETANODAVIRUS SE CLASIFICAN EN 4 GENOTIPOS: SJNNV, TPNNV, RGNNV Y BFNNV, EN BASE A UNA SECUENCIA VARIABLE DEL ARN2, SIN EMBARGO, EN EL SUR DE EUROPA SE HAN AISLADO RECOMBINANTES NATURALES ENTRE LOS GENOTIPOS RGNNV Y SJNNV (EN LAS DOS FORMAS, SJNNV/RGNNV Y RGNNV/SJNNV) A PARTIR DE LENGUADO, DORADA Y LUBINALAS CEPAS RECOMBINANTES AISLADAS EN LA PENINSULA IBERICA A PARTIR DE LENGUADOS Y DORADAS ENFERMOS PRESENTAN UN ARN1 TIPO RGNNV Y UN ARN2 DE TIPO SJNNV Y MUESTRAN DIFERENCIAS A NIVEL GENOMICO Y PROTEICO, ASI COMO EN LA REGION 3 NO CODIFICANTE (NCR) CON LAS CEPAS DE REFERENCIA DE CADA GENOTIPO, ESTOS RECOMBINANTES SON LOS UNICOS QUE SE HAN ASOCIADO CON INFECCIONES NATURALES EN LENGUADO Y DORADA EN LA CUENCA MEDITERRANEA, LO QUE SUGIERE QUE LOS CAMBIOS GENOMICOS CAUSADOS POR LA RECOMBINACION PODRIAN FAVORECER LA COLONIZACION DE ESTAS ESPECIES DE PECES, ESTAS CEPAS TIENEN UNA CAPSIDE SJNNV QUE PRESENTA VARIOS CAMBIOS, HASTA 6, CON RESPECTO A LA CEPA TIPO, PERO TODAS COMPARTEN 3 SUSTITUCIONES, HEMOS DEMOSTRADO QUE LA REVERSION DE 2 DE ESTAS POSICIONES AL TIPO SJNNV REDUCE LA VIRULENCIA DEL LENGUADO (DISMINUCIONES DE LA MORTALIDAD DEL 40-50%), SIN EMBARGO, LA MUTACION DE LAS SUSTITUCIONES DE NUCLEOTIDOS OBSERVADA EN LA REGION 3'NCR DE AMBOS ARN PROVOCA UNA ATENUACION DE VIRULENCIA SIGNIFICATIVAMENTE MAS ALTA (NIVELES DE MORTALIDAD DE ALREDEDOR DEL 25-30%), PROBABLEMENTE RELACIONADA CON CAMBIOS EN LA INTERACCION DEL ARN2 CON PROTEINAS CELULARES DEL HUESPED O EN LA REGULACION DE LA REPLICACION EN EL CASO DE MUTACIONES DE ARN1,EN LA ACTUALIDAD NO EXISTEN PROCEDIMIENTOS EFECTIVOS PARA TRATAR LA ERV, POR LO TANTO, LOS ESFUERZOS DE INVESTIGACION SE HAN CENTRADO EN EL DESARROLLO DE UNA VACUNA, HASTA LA FECHA, SOLO UNA VACUNA COMERCIAL HA SIDO AUTORIZADA EN EUROPA PARA INMUNIZAR A LA LUBINA CONTRA LA INFECCION POR RGNNV MEDIANTE INYECCION, LO QUE DIFICULTA LA VACUNACION DE PECES PEQUEÑOS, LOS MAS SUSCEPTIBLES A LA ENFERMEDAD, ADEMAS, SE HAN PUBLICADO DIFERENTES ESTRATEGIAS EXPERIMENTALES DE VACUNACION CON CEPAS RGNNV O SJNNV Y SE HA DEMOSTRADO QUE NO SE PRODUCE PROTECCION CRUZADA ENTRE AMBOS GENOTIPOS,EN BASE A LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN EL PROYECTO ANTERIOR Y EN EL HECHO DE QUE SOLO LAS CEPAS RECOMBINANTES SON PATOGENAS PARA DORADA Y LENGUADO, EL OBJETIVO PRINCIPAL DE ESTA PROPUESTA ES OBTENER UNA VACUNA EFICAZ CONTRA BETANODAVIRUS PARA AMBAS ESPECIES, SE UTILIZARAN DOS ENFOQUES DIFERENTES: VACUNA INACTIVADA (UTILIZANDO UNA CEPA RECOMBINANTE AISLADA DE LENGUADO) Y UNA VACUNA ATENUADA (SE LOGRARA LA ATENUACION COMPLETA COMBINANDO MUTACIONES EN EL 3'NCR DE AMBOS ARN DE LA CEPA RECOMBINANTE), ADEMAS, SE VALORARAN 3 VIAS DE ADMINISTRACION: INYECCION, BAÑO Y VIA ORAL, LAS 2 VACUNAS SE VALIDARAN EN LENGUADO, ASI COMO UNA VACUNA DE ADN PRODUCIDA POR EL EQUIPO DEL SUBPROYECTO 2 (QUE EVALUARA LAS VACUNAS EN DORADA), POR ULTIMO, SE EVALUARA LA PRODUCCION DE ANTICUERPOS (TOTAL Y NEUTRALIZANTES) Y LA EXPRESION DE DETERMINADOS INMUNOGENES EN LOS PECES VACUN BETANODAVIRUS\LENGUADO\DORADA\VACUNAS\VALIDACIÓN\RESPUESTA INMUNE