Descripción del proyecto
LA LUBINA ES UNA DE LAS ESPECIES CULTIVADAS MAS IMPORTANTES DEL AREA MEDITERRANEA, YA QUE POSEE UN VALOR DE MERCADO MUY ELEVADO, SIN EMBARGO, SU PRODUCCION SUFRE GRAVES PERDIDAS ECONOMICAS COMO CONSECUENCIA DE LA APARICION DE BROTES DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS, UNA DE LAS ENFERMEDADES QUE TIENE MAYOR IMPACTO EN SU PRODUCCION ES LA NECROSIS NERVIOSA VIRAL, CUYO AGENTE ETIOLOLOGICO ES UN BETANODAVIRUS (VIRUS DE LA NECROSIS NERVIOSA VIRAL, NNV), QUE PRESENTA UN GENOMA FORMADO POR DOS SEGMENTOS DE ARN MONOCATENARIO: EL ARN1, QUE CODIFICA LA POLIMERASA VIRAL, Y EL ARN2, QUE CODIFICA LA PROTEINA DE LA CAPSIDE, SE SINTETIZA, ADEMAS, UN ARN SUBGENOMICO (ARN3), QUE CODIFICA LAS PROTEINAS B1 (FACTOR ANTI-APOPTOTICO) Y B2 (CONFIERE PROTECCION FRENTE A ARN INTERFERENTES CELULARES), AUNQUE LOS BETANODAVIRUS SE CLASIFICAN EN 4 GENOTIPOS SEGUN LA REGION T4 DEL ARN2, SOLO UNO DE ELLOS, EL GENOTIPO RGNNV, CAUSA ALTAS MOTALIDADES EN LUBINA, TODA ENFERMEDAD DE ETIOLOGIA INFECCIOSA ES EL RESULTADO DE LA INTERACCION DE TRES COMPONENTES: LA VIRULENCIA DEL PATOGENO, LOS MECANISMOS DE DEFENSA DEL HOSPEDADOR, Y LOS FACTORES AMBIENTALES QUE MODULAN LA INTERACCION ENTRE LOS DOS COMPONENTES ANTERIORES DURANTE EL DESARROLLO DE LA NECROSIS NERVIOSA VIRAL EN LUBINA, ESTE PROYECTO ABORDA EL ESTUDIO DE ESTOS TRES FACTORES, EN CONCRETO, LA IMPLICACION DEL VIRUS SERA CARACTERIZADA EN EL OBJETIVO 1, EN EL QUE SE IDENTIFICARAN LOS DETERMINANTES DE VIRULENCIA DEL VIRUS RELACIONADOS CON SU UNION A LAS CELULAS SUSCEPTIBLES (PRESENTES EN EL ARN2) Y CON EL ANTAGONISMO FRENTE A LOS MECANISMOS DE DEFENSA DEL HOSPEDADOR (PRESENTES EN EL ARN3), PARA LLEVAR A CABO ESTE OBJETIVO SE UTILIZARA LA TECNICA DE GENETICA INVERSA, CON LA QUE SE OBTENDRAN VIRUS MUTADOS EN LAS POSIBLES REGIONES DETERMINANTES DE VIRULENCIA, POR OTRA PARTE, LA IMPLICACION DEL HOSPEDADOR ESTA BASADA EN LA RESPUESTA DE SU SISTEMA INMUNE, CUYO ESTUDIO SERA ABORDADO EN EL OBJETIVO 2, LOS ESTUDIOS SOBRE RESPUESTA INMUNE INCLUYEN EL DESARROLLO DE UNA HERRAMIENTA DE OPENARRAY (BASADA EN PCR A TIEMPO REAL CON SONDAS TAQMAN) QUE PERMITIRA LA CUANTIFICACION DE LA TRANSCRIPCION DE UN NUMERO ELEVADO DE GENES DE LUBINA, LA CARACTERIZACION FUNCIONAL DE UNA DE LAS PRINCIPALES PROTEINAS DEL SISTEMA IFN I, LA PROTEINA ISG15, Y LA DETERMINACION DE LA IMPLICACION DE RUTAS DE DEFENSA ANTIVIRICAS INDEPENDIENTES DEL SISTEMA IFN I, CUYA IMPORTANCIA ESTA SIENDO SEÑALADA EN TRABAJOS DE MUY RECIENTE PUBLICACION, EN ESTE ULTIMO ESTUDIO SE APLICARA LA TECNOLOGIA CRISPR-CAS PARA DESARROLLAR CELULAS DE LUBINA QUE TENGAN BLOQUEADA LA RUTA DE SEÑALIZACION DEL IFN I,POR ULTIMO, DADO QUE LA UTILIZACION DE INMUNOESTIMULANTES EN ACUICULTURA ES UNA HERRAMIENTA DE PREVENCION Y CONTROL MUY DEMANDADA DEBIDO A LA FALTA DE VACUNAS O TRATAMIENTOS ANTIVIRICOS EFECTIVOS, EL OBJETIVO 3 DEL PROYECTO PLANTEA EVALUAR EL EFECTO INMUNOESTIMULANTE DE POLISACARIDOS EXTRAIDOS DE MICROALGAS MARINAS (EUGLENA SP, Y PORPHYRIDIUM CRUENTUM) SOBRE EL SISTEMA INMUNE DE LUBINA, Y COMO ESTA ESTIMULACION AFECTA A LA INTERACCION NNV-LUBINA Y, POR TANTO, AL CURSO DE LA INFECCION, LUBINA\BETANODAVIRUS\DETERMINANTES DE VIRULENCIA\OPENARRAY\IFN I\CRISPR-CAS\INMUNOESTIMULANTES