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BFU2015-65880-P

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NUEVAS DNA POLIMERASAS CON IMPLICACIONES CLINICAS Y BIOTECNOLOGICAS

POL LAMBDA Y POL MU SON LAS DOS DNA POLIMERASAS HUMANAS IMPLICADAS EN LA REPARACION DE ROTURAS DE DOBLE CADENA EN EL DNA POR EL MECANISMO DE REUNION DE EXTREMOS NO HOMOLOGOS (NHEJ), Y FUERON DESCUBIERTAS EN EL AÑO 2000 POR EL GRUP... ver más

01/01/2015

CSIC

332K€

Presupuesto del proyecto: 332K€

Líder del proyecto

AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA... No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 2-3 | 552M€

Fecha límite participación Sin fecha límite de participación.

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Líder del proyecto

AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA... No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 2-3 | 552M€

Presupuesto del proyecto 332K€

Fecha límite de participación Sin fecha límite de participación.

Descripción del proyecto POL LAMBDA Y POL MU SON LAS DOS DNA POLIMERASAS HUMANAS IMPLICADAS EN LA REPARACION DE ROTURAS DE DOBLE CADENA EN EL DNA POR EL MECANISMO DE REUNION DE EXTREMOS NO HOMOLOGOS (NHEJ), Y FUERON DESCUBIERTAS EN EL AÑO 2000 POR EL GRUPO DE LUIS BLANCO, COMO PRIMER OBJETIVO DEL PROYECTO, SE ESTUDIARA LA REGULACION DE LA POL MU HUMANA POR LAS QUINASAS DE RESPUESTA A DAÑO CASEIN QUINASA II (CKII) Y DNA-PK, UNA KINASA ESPECIFICAMENTE ASOCIADA AL MECANISMO DE NHEJ, ASIMISMO, TRATAREMOS DE DETERMINAR LA POSIBLE CONTRIBUCION DE POL LAMBDA Y POL MU A LA TUMOROGENESIS, CARACTERIZANDO IN VIVO E IN VITRO VARIANTES TUMORALES DE ESTAS DOS DNA POLIMERASAS HUMANAS, QUE PUDIERAN TENER PROPIEDADES ALTERADAS, AFECTANDO EL BALANCE ENTRE LA REPARACION POR RECOMBINACION HOMOLOGA (HR) Y NHEJ, Y CONTRIBUYENDO ASI A LA INESTABILIDAD GENOMICA,EL SEGUNDO OBJETIVO DEL PROYECTO SE CENTRARA EN LA PRIMPOL HUMANA, UN ENZIMA CON ACTIVIDADES DNA PRIMASA Y DNA POLIMERASA, CARACTERIZADO RECIENTEMENTE POR EL GRUPO DE LUIS BLANCO, Y QUE ESTA IMPLICADO EN SINTESIS A TRAVES DE LESIONES (TLS) Y EN EL RESCATE DE HORQUILLAS DE REPLICACION BLOQUEADAS, SE LLEVARA A CABO UN ANALISIS DETALLADO DEL SITIO ACTIVO PARA DETERMINAR LAS BASE MOLECULARES DE LA SELECCION DE NUCLEOTIDOS (DNTPS VS RNTPS), LA FIDELIDAD DE COPIA, LOS METALES ACTIVADORES ALTERNATIVOS, Y EL EFECTO DE INHIBIDORES DE PRIMASAS Y POLIMERASAS, ASIMISMO, DEFINIREMOS LAS INTERACCIONES DE PRIMPOL CON DNA QUE PUDIERAN SER RESPONSABLES DE LA TOLERANCIA DE LESIONES, Y DE SU GRAN CAPACIDAD DE REALINEAR EL PRIMER, LO QUE PODRIA IMPLICAR UN PAPEL DE PRIMPOL EN TOLERAR LAS ROTURAS DE CADENA SENCILLA ENCONTRADAS DURANTE LA REPLICACION, TAMBIEN DEFINIREMOS EL SITIO DE INTERACCION CON LAS SSB NUCLEAR Y MITOCONDRIAL, Y ANALIZAREMOS POTENCIALES DIANAS DE FOSFORILACION EN RESPUESTA A DAÑO CARACTERIZANDO MUTANTES NO FOSFORILABLES Y FOSFOMIMETICOS EN ENSAYOS IN VITRO E IN VIVO, ABORDAREMOS LA FUNCION MITOCONDRIAL DE PRIMPOL DETERMINANDO LA INTERACCION FUNCIONAL CON POL GAMMA, ANALIZANDO LA REPLICACION DEL DNA MITOCONDRIAL EN CONDICIONES DE ELEVADO DAÑO OXIDATIVO Y SU DEPENDENCIA DE PRIMPOL, Y EVALUAREMOS EL IMPACTO DE PRIMPOL EN MUTAGENESIS SECUENCIANDO EL DNA MITOCONDRIAL DE NUESTRO MODELO PRIMPOL-KO MURINO, LA COMPARACION CON EL CONTROL WILD-TYPE NOS APORTARA LA FIRMA MUTAGENICA DE PRIMPOL, Y NOS PERMITIRA COMPARARLA CON LA OBTENIDA MEDIANTE ESTUDIOS IN VITRO DE SINTESIS A TRAVES DE LESIONES, POR ULTIMO, CARACTERIZAREMOS IN VITRO LAS VARIANTES TUMORALES IDENTIFICADAS EN LA PRIMPOL HUMANA, Y EVALUAREMOS EL IMPACTO IN VIVO DE AQUELLAS QUE PRESENTEN ALTERACIONES FUNCIONALES,COMO TERCER OBJETIVO, SE LLEVARA A CABO UN ESTUDIO POR EVOLUCION DIRIGIDA DEL SITIO ACTIVO DE PRIMPOL, CON EL OBJETO DE OBTENER VARIANTES CON ALTERADA SELECCION DE NUCLEOTIDOS Y MEJORADA CAPACIDAD DE INICIACION EN MOLDES HETEROGENEOS, LA OBTENCION DE VARIANTES DE PRIMPOL CON PROPIEDADES MODIFICADAS PODRIA SER EXPLOTADA PARA SU USO BIOTECNOLOGICO, ESPECIFICAMENTE EN PROCEDIMIENTOS DE AMPLIFICACION DE DNA QUE REQUIERAN UN MINIMO SESGO, POR ULTIMO, COMO CUARTO OBJETIVO SE PRETENDE CARACTERIZAR UNA NUEVA DNA POLIMERASA CODIFICADA EN EL GENOMA MITOCONDRIAL DE TRICHOPLAX ADHERENS (EL METAZOO MAS SENCILLO, ANCESTRO DE LOS ANIMALES), SU ESTRUCTURA PRIMARIA SUGIERE UN ENORME POTENCIAL BIOTECNOLOGICO, BASADO EN SU PRESUNTA PROCESIVIDAD, DESPLAZAMIENTO DE BANDA, PROOFREADING, Y POTENCIAL CAPACIDAD PARA TOLERAR LESIONES, DNA\ROTURAS\NHEJ\POLIMERASA\AMPLIFICACIÓN\PRIMPOL\MITOCONDRIA\PRIMASA\CÁNCER

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