MODELOS ANIMALES PARA LAS DISTROFIAS DE RETINA: ESTRATEGIAS DE EDICION GENOMICA,...
MODELOS ANIMALES PARA LAS DISTROFIAS DE RETINA: ESTRATEGIAS DE EDICION GENOMICA, FENOTIPADO Y NANOTERAPIA
LA DISFUNCION Y MUERTE DE LOS FOTORECEPTORES CONSTITUYE LA CAUSA PRINCIPAL DE PERDIDA DE VISION EN LAS DISTROFIAS DE RETINA HEREDITARIAS (IRDS), UN GRUPO DE ENFERMEDADES DE LA RETINA, DE FENOTIPO SEVERO Y GENETICAMENTE MUY HETEROG...
LA DISFUNCION Y MUERTE DE LOS FOTORECEPTORES CONSTITUYE LA CAUSA PRINCIPAL DE PERDIDA DE VISION EN LAS DISTROFIAS DE RETINA HEREDITARIAS (IRDS), UN GRUPO DE ENFERMEDADES DE LA RETINA, DE FENOTIPO SEVERO Y GENETICAMENTE MUY HETEROGENEO. TRAS MAS DE 30 AÑOS DE INVESTIGACION, SE CONOCEN CERCA DE 300 GENES CAUSATIVOS PERO TODAVIA FALTA UN CORPUS DE CONOCIMIENTO QUE CORRELACIONE DE FORMA INTEGRADA LOS GENES IRD Y SUS MUTACIONES (GENOTIPO) CON SU FUNCION FISIOLOGICA EN LA SALUD Y SU DISFUNCION EN LA ENFERMEDAD (FENOTIPO). POR TANTO, ADEMAS DE LA IDENTIFICACION DE NUEVOS GENES, ES CRUCIAL LA CARACTERIZACION FUNCIONAL DE LAS VIAS METABOLICAS Y DE SEÑALIZACION QUE SE VEN ALTERADAS POR MUTACIONES PATOLOGICAS EN ESTOS GENES CAUSATIVOS, CON EL FIN DE DISEÑAR ESTRATEGIAS TERAPEUTICAS MAS EFICIENTES QUE LOGREN DETENER EL PROGRESO DE LA NEURODEGENERACION RETINIANA, O INCLUSO, CURAR LA ENFERMEDAD. NUESTRO OBJETIVO ES EL ESTUDIO FUNCIONAL DE CERKL, NR2E3, Y ATXN3 GENES IMPLICADOS EN IRDS Y REPRESENTATIVOS DE VIAS CELULARES RELEVANTES EN RETINA A PARTIR DEL DESARROLLO Y CARACTERIZACION DE MODELOS ANIMALES EN RATON Y PEZ CEBRA. ESTOS MODELOS HAN SIDO YA GENERADOS EN NUESTRO GRUPO, BIEN MEDIANTE LA NOVEDOSA ESTRATEGIA DE EDICION GENOMICA (CRISPRCAS9) PARA CERKL (KNOCKOUT) Y NR2E3 (KNOCKIN), BIEN POR KNOCKDOWN MEDIANTE MORFOLINOS (ATXN3), PERO FALTA EL ANALISIS FENOTIPICO A NIVELES BIOQUIMICO, MORFOLOGICO Y FISIOLOGICO. PARA ELLO, UTILIZAREMOS INNOVADORAS TECNICAS (OPTIMIZADAS EN NUESTROS LABORATORIOS) COMO: CULTIVOS PRIMARIOS DE FOTORECEPTORES Y DE EXPLANTES DE RETINA DE RATON EN CONDICIONES NORMALES Y BAJO ESTRES, CO-TRANSFECCION DE FACTORES DE TRANSCRIPCION Y PROMOTORES DIANA, CHIP-SEQ, CARACTERIZACION DE INTERACTOMAS MEDIANTE INMUNOPRECIPITACION ACOPLADA A MALDI-TOF, TECNICAS DE TRANSGENESIS TRANSITORIA IN VIVO EN RETINA DE RATON MEDIANTE MICROINYECCION SUBRETINAL, SEGUIDAS DE UN DETALLADO ANALISIS HISTOLOGICO E INMUNODETECCION POR MICROSCOPIA CONFOCAL. POR ULTIMO, Y A TRAVES DE COLABORACION CON UN GRUPO DE BIONANOTECNOLOGIA DEL DPT. OF PHYSICS (UNIVERSITY OF OXFORD), EXPLORAREMOS COMO "PRUEBA DE PRINCIPIO" LA VIABILIDAD DE UN POSIBLE TRATAMIENTO POR TERAPIA GENICA CON NANOPARTICULAS ENVUELTAS EN ADN (SMART NANOSYSTEM) EN EL MODELO CERKL-/- GENERADO POR CRISPR/CAS9, MEDIANTE EL ESTUDIO DE LA EFICIENCIA EN LA ENTREGA DEL GEN EN FOTORECEPTORES COMPARADA CON OTRAS ESTRATEGIAS, COMO MICROINYECCION SUBRETINAL SEGUIDA DE ELECTROPORACION O, EN UN FUTURO, VIRUS ADENO-ASOCIADOS, LA TERAPIA GENICA ACTUALMENTE UTILIZADA EN RETINA. RESULTADOS ESPERADOS: PROFUNDIZAREMOS EN LAS REDES METABOLICAS Y DE SEÑALIZACION ALTERADAS EN EL PROCESO DE NEURODEGENERACION DE LA RETINA DETECTANDO, BIEN AQUELLAS DIANAS DE INTERES TERAPEUTICO, O BIEN INDICADORES MOLECULARES FIABLES DE LA PROGRESION DEL FENOTIPO. ADEMAS, EXPLORAREMOS LA VIABILIDAD DE UNA POSIBLE TERAPIA/RESCATE GENETICO POR NANOPARTICULAS ENVUELTAS CON ADN, MIDIENDO: I) EFICIENCIA DE ENTREGA DEL GEN VERSUS OTRAS ESTRATEGIAS; II) SUPERVIVENCIA/APOPTOSIS DE LOS FOTORECEPTORES Y III) EXPRESION DE GENES RELEVANTES PARA LA FUNCION DE CONOS Y BASTONES. ISTROFIAS DE RETINA\NANOTECNOLOGÍA\CRISPR/CAS9\KNOCKOUT\KNOCKDOWN\ATXN3\NR2E3\CERKL\MODELOS ANIMALESver más
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