MICROGELES BIOMIMETICOS PARA EL ESTUDIO DEL MICROENTORNO DEL TUMOR (TME) Y LA TR...
MICROGELES BIOMIMETICOS PARA EL ESTUDIO DEL MICROENTORNO DEL TUMOR (TME) Y LA TRANSICION EPITELIO MESENQUIMA (EMT) EN CANCER DE PULMON
EL OBJETIVO DEL SUBPROYECTO 2 ES AUMENTAR EL CONOCIMIENTO EN RELACION A ASPECTOS CLAVE DE LA TRANSICION EPITELIAL A MESENQUIMAL (EMT), UN EVENTO FUNDAMENTAL EN LA INVASION TUMORAL, LA EMT CONFIERE A LAS CELULAS TUMORALES UNA MAYOR...
EL OBJETIVO DEL SUBPROYECTO 2 ES AUMENTAR EL CONOCIMIENTO EN RELACION A ASPECTOS CLAVE DE LA TRANSICION EPITELIAL A MESENQUIMAL (EMT), UN EVENTO FUNDAMENTAL EN LA INVASION TUMORAL, LA EMT CONFIERE A LAS CELULAS TUMORALES UNA MAYOR CAPACIDAD DE INICIAR TUMORES, UN MAYOR POTENCIAL METASTATICO Y UN INCREMENTO EN LA ADQUISICION DE RESISTENCIA A DIFERENTES FARMACOS Y TRATAMIENTOS ANTITUMORALES, ADAPTAREMOS EL MICROGEL BIOMIMETICO DESARROLLADO EN EL CONTEXTO DE ESTE PROYECTO COORDINADO PARA EMULAR EL MICROAMBIENTE TUMORAL (TME) CARACTERISTICO DEL CANCER DE PULMON, INCREMENTAREMOS LA CONSISTENCIA DEL MICROGEL AUMENTANDO LA DENSIDAD DE MICROPARTICULAS, EL MICROGEL ADEMAS INCORPORARA MICROPARTICULAS CUBIERTAS POR ACIDO HIALURONICO, CAPAZ DE ACTIVAR EMT, COLAGENO Y TGF-BETA, UNA CITOQUINA MULTIFUNCIONAL IMPLICADA EN EL CONTROL DEL TME, EN ESTE MICROGEL CO-CULTIVAREMOS LINEAS CELULARES DE CANCER DE PULMON (A549, H460 Y H1792), CELULAS MADRE MESENQUIMATOSAS (MSC) Y FIBROBLASTOS ASOCIADOS AL CANCER (CAFS) AISLADOS DE TUMORES DE PULMON, LAS MSCS CONTACTAN CON LAS CELULAS CANCEROSAS Y ADQUIEREN COMPLEJOS FENOTIPOS PARTICIPANDO EN LA MODULACION DEL SISTEMA INMUNITARIO, EN LA INDUCCION DE LA DIFERENCIACION DE CAFS A PARTIR DE FIBROBLASTOS NORMALES Y FACILITAN LA METASTASIS TUMORAL, LOS CAFS JUEGAN UN PAPEL RELEVANTE EN LA PROGRESION, METASTASIS, ANGIOGENESIS Y DESARROLLO DE QUIMIORESISTENCIA DE LOS TUMORES, ESTAS CELULAS INDUCEN CAMBIOS FENOTIPICOS EN OTRAS TANTO POR CONTACTO DIRECTO COMO MEDIANTE LA LIBERACION DE DIFERENTES MOLECULAS, LOS EXO-MIRNAS ACTUAN COMO MENSAJEROS ENTRE LAS CELULAS TUMORALES Y ESTROMALES, COLABORANDO EN LA PROGRESION DE EVENTOS CLAVE EN LA EMT COMO SON LA TRANSFORMACION MALIGNA DE FIBROBLASTOS NORMALES A CAFS, LA REPRESION DE LA E-CADHERINA O LA INDUCCION DE N-CADHERINA Y VIMENTINA, ENTRE OTROS, OPTIMIZAREMOS LAS CONDICIONES DE CULTIVO DE LAS CELULAS INCORPORADAS AL MICROGEL, EN PRIMER LUGAR, PARA CADA TIPO CELULAR DE MANERA AISLADA Y POSTERIORMENTE PARA LAS CELULAS EN CO-CULTIVO, DESARROLLAREMOS HERRAMIENTAS IN SILICO PARA PREDECIR Y CONTROLAR LA PROLIFERACION DE LAS CELULAS EN LA PLATAFORMA, ASI COMO ASPECTOS CLAVE EN EL CULTIVO COMO SON LA DIFUSION DE NUTRIENTES O EL ACLARAMIENTO CELULAR, LOS CAMBIOS EN LA EXPRESION GENICA Y EN LOS PERFILES DE EXPRESION DE MIRNA SE ANALIZARAN MEDIANTE MICROARRAYS DE ALTA DENSIDAD Y REAL TIME RT-PCR, LA CARACTERIZACION MORFOLOGICA DE LAS CELULAS SE REALIZARA MEDIANTE MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA, Y LOS CAMBIOS ULTRAESTRUCTURALES MEDIANTE MICROSCOPIA ELECTRONICA DE TRANSMISION, ESTUDIAREMOS LA ORGANIZACION ESPACIAL DE LAS CELULAS CO-CULTIVADAS MEDIANTE MICROSCOPIA CONFOCAL UTILIZANDO CELULAS CANCERIGENAS Y MSCS TRANSFECTADAS CON VECTORES LENTIVIRALES PARA EXPRESAR PROTEINAS FLUORESCENTES, ESTUDIAREMOS EL EFECTO DE LA ESTIMULACION MAGNETICA Y MECANICA EN LAS MSCS CO-CULTIVADAS CON CAFS Y CELULAS TUMORALES EN MICROGELES CON MICROPARTICULAS MAGNETICAS QUE, EN COMBINACION CON BIORREACTORES ESPECIFICOS DISEÑADOS Y ADAPTADOS POR NUESTRO CONSORCIO, NOS PERMITIRAN ESTUDIAR SUS EFECTOS EN RELACION A LA VIABILIDAD, PROLIFERACION Y DIFERENCIACION CELULAR, ESPERAMOS QUE LOS RESULTADOS DE ESTE PROYECTO CONTRIBUYAN A DESARROLLAR UN MODELO EXPERIMENTAL BASADO EN UN MICROGEL BIOMIMETICO DEL CANCER DE PULMON Y EXPANDIR NUESTRO CONOCIMIENTO CON RESPECTO AL TME, EMT Y MSCS, CANCER DE PULMON\TRANSICION EPITELIO-MESENQUIMA (EMT)\MICROAMBIENTE TUMORAL (TME)\BIORREACTORES\ESTIMULACION CELULAR ELECTRO-MECANICA\CELULAS MADRE MESENQUIMALES (MSCS)\CULTIVO 3D\EXOSOMAS\MICROGEL\MIRNASver más
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