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PID2019-104176RB-I00

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MEJORA DE LAS PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE RETROTRANSCRIPTASAS DEL VIH, UTILES EN...

MEJORA DE LAS PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE RETROTRANSCRIPTASAS DEL VIH, UTILES EN APLICACIONES BIOTECNOLOGICAS LAS INFECCIONES CAUSADAS POR VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 (VIH-1) Y TIPO 2 (VIH-2) CONSTITUYEN UN PROBLEMA DE SALUD PUBLICA A NIVEL MUNDIAL, LA RETROTRANSCRIPTASA (RT) O TRANSCRIPTASA INVERSA ES LA ENZIMA RESPONSABL... ver más

01/01/2019

CSIC

145K€

Presupuesto del proyecto: 145K€

Líder del proyecto

AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA... No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 2-3 | 552M€

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2019-01-01 No tenemos la información de la convocatoria

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Líder del proyecto

AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA... No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 2-3 | 552M€

Presupuesto del proyecto 145K€

Descripción del proyecto LAS INFECCIONES CAUSADAS POR VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 (VIH-1) Y TIPO 2 (VIH-2) CONSTITUYEN UN PROBLEMA DE SALUD PUBLICA A NIVEL MUNDIAL, LA RETROTRANSCRIPTASA (RT) O TRANSCRIPTASA INVERSA ES LA ENZIMA RESPONSABLE DE LA REPLICACION DEL ARN GENOMICO VIRAL, LAS RTS DEL VIH TIENEN UNA BAJA FIDELIDAD DE COPIA Y SON DIANAS FUNDAMENTALES DE LA TERAPIA ANTIRRETROVIRAL, SIN EMBARGO, LA APARICION DE RESISTENCIA CONSTITUYE UNA SERIA AMENAZA PARA EL EXITO DE LAS TERAPIAS ANTIVIRALES, AUNQUE TODOS LOS INHIBIDORES DE LA RT APROBADOS PARA SU USO CLINICO ACTUAN SOBRE SU ACTIVIDAD ADN POLIMERASA, LAS RTS TIENEN ADEMAS ACTIVIDAD RNASA H Y TIENEN LA CAPACIDAD DE DESPLAZAR EL MOLDE DURANTE LA SINTESIS DE ADN,POR OTRO LADO, LAS RTS SE USAN EN TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE PARA SINTETIZAR ADN COMPLEMENTARIO (ADNC) A PARTIR DE ARN MENSAJERO (ARNM), CLAVE EN LOS ESTUDIOS DE EXPRESION GENICA Y TRANSCRIPTOMICA, PARA MUCHAS APLICACIONES BIOMEDICAS SE REQUIEREN METODOS EFICIENTES Y BARATOS QUE PERMITAN OBTENER LIBRERIAS DE ADNC COMPLETAS, A PARTIR DE CANTIDADES MUY PEQUEÑAS DE ARNM, ESTO ES ESPECIALMENTE IMPORTANTE DE CARA AL DESARROLLO DE LA MEDICINA PERSONALIZADA DONDE LA CARACTERIZACION DE CELULAS INDIVIDUALES SE ESPERA QUE JUEGUE UN PAPEL MUY IMPORTANTE, EN ESTE PROYECTO PRETENDEMOS IDENTIFICAR DETERMINANTES MOLECULARES QUE RESULTEN CLAVE PARA (1) CONTROLAR LA AFINIDAD DE LA RT POR COMPLEJOS MOLDE-INICIADOR, Y (2) ENTENDER EL PAPEL DE DISTINTOS AMINOACIDOS DE LA RT EN LOS MECANISMOS DE DESPLAZAMIENTO DE BANDA DURANTE EL PROCESO DE RETROTRANSCRIPCION, ESTE CONOCIMIENTO SERA TEORICAMENTE UTIL PARA DESARROLLAR RTS QUE PERMITAN OBTENER CDNA A PARTIR DE CANTIDADES INFIMAS DE RNA Y/O ENZIMAS QUE EVITEN SESGOS EN LA SECUENCIACION MASIVA DE ARNM, ADEMAS, PRETENDEMOS DESARROLLAR NUEVOS METODOS BASADOS EN SECUENCIACION MASIVA PARA LA DETERMINACION DE TASAS DE ERROR (FIDELIDAD DE COPIA) DURANTE LA SINTESIS DE ADN DEPENDIENTE DE ARN Y EVALUAR CON ELLOS LOS EFECTOS DE DISTINTAS MUTACIONES Y QUE EVITEN EL SESGO PRODUCIDO POR LA HETEROGENEIDAD DEL ARN DE PARTIDA, CAUSADO POR ERRORES EN EL PROCESO DE TRANSCRIPCION, IDEALMENTE, INTENTAMOS OBTENER RTS EFICIENTES A TEMPERATURAS ALTAS, CON ELEVADA FIDELIDAD Y AFINIDAD POR EL SUSTRATO Y SI FUESE POSIBLE, CARENTES DE DESPLAZAMIENTO DE BANDA,PARA CONSEGUIR ESOS OBJETIVOS SE INTRODUCIRAN CAMBIOS DE AMINOACIDO EN RTS DEL VIH, REPRESENTATIVAS DE LOS CUATRO GRUPOS FILOGENETICOS MAS IMPORTANTES (HIV-1 GRUPO M SUBTIPO B, HIV-1 GRUPO O, HIV-2 GRUPO A Y HIV-2 GRUPO B), ESTOS CAMBIOS INCLUIRAN SUSTITUCIONES DE AMINOACIDO EN POSICIONES IMPLICADAS EN INTERACCIONES DE LA RT CON EL ACIDO NUCLEICO (P,EJ,, EN LAS SECUENCIAS TNQKA Y SQYVXXI DE SU DOMINIO RNASA H), JUNTO CON CAMBIOS CONOCIDOS QUE AUMENTAN SU TERMOESTABILIDAD Y/O FIDELIDAD DE COPIA, TAMBIEN EVALUAREMOS EL IMPACTO DE MUTACIONES DE RESISTENCIA A INHIBIDORES DE LA RT ANALOGOS A NUCLEOSIDO EN LA CAPACIDAD DE DESPLAZAMIENTO DE BANDA DE LA ENZIMA, SE LLEVARAN A CABO ENSAYOS ENZIMATICOS CON COMPLEJOS MOLDE-INICIADOR MARCADOS RADIACTIVAMENTE Y SE EVALUARA LA EFICACIA CATALITICA DE LAS RTS A TEMPERATURA ELEVADA EN REACCIONES DE RT-PCR, ADEMAS DE SU FIDELIDAD DE COPIA, LOS ANALISIS DE FIDELIDAD SE COMPLEMENTARAN CON EL DISEÑO DE NUEVOS METODOS BASADOS EN SECUENCIACION MASIVA, EMPLEANDO OLIGONUCLEOTIDOS DEGENERADOS ("PRIMER IDS") PARA MARCAR TANTO RNA TRANSCRITO COMO CDNA PRODUCIDO POR LA RT, VIH\RETROTRANSCRIPTASA\RETROVIRUS\POLIMERASAS\DESPLAZAMIENTO DE BANDA\FIDELIDAD

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