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BIO2010-15542

Financiado
VARIANTES DE LA RETROTRANSCRIPTASA DEL VIH-1 GRUPO O CON MAYOR ESTABILIDAD, AFIN...
VARIANTES DE LA RETROTRANSCRIPTASA DEL VIH-1 GRUPO O CON MAYOR ESTABILIDAD, AFINIDAD POR ACIDOS NUCLEICOS Y FIDELIDAD DE COPIA LAS RETROTRANSCRIPTASAS (RTS) SON ADN POLIMERASAS CAPACES DE UTILIZAR COMO MOLDE TANTO ARN COMO ADN, LAS RTS PRESENTAN UNA ELEVADA TASA DE ERROR (ALREDEDOR DE 10(-4)), LO QUE EXPLICARIA EN PARTE LA ENORME VARIABILIDAD GENETICA OBS... LAS RETROTRANSCRIPTASAS (RTS) SON ADN POLIMERASAS CAPACES DE UTILIZAR COMO MOLDE TANTO ARN COMO ADN, LAS RTS PRESENTAN UNA ELEVADA TASA DE ERROR (ALREDEDOR DE 10(-4)), LO QUE EXPLICARIA EN PARTE LA ENORME VARIABILIDAD GENETICA OBSERVADA EN ALGUNOS RETROVIRUS COMO EL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 (VIH-1), A PESAR DE ELLO, LAS VARIANTES DE LA RT DEL VIRUS MOLONEY DE LA LEUCEMIA DE RATON (MLV) Y DEL VIRUS DE LA MIELOBLASTOSIS DE AVES (AMV) SE USAN DE FORMA GENERALIZADA EN TECNOLOGIA DE ADN RECOMBINANTE, PARA LA SINTESIS DE ADN COPIA A PARTIR DE ARN MENSAJERO (ARNM), AUNQUE LA RT DEL VIH-1 PARECE SER MAS ACTIVA QUE LAS RTS DE MLV Y AMV A 50-60 ºC, SU FIDELIDAD DE COPIA ES MAS DE 10 VECES MENOR QUE LA DESCRITA PARA LAS RTS DE MLV Y AMV, SE SABE QUE AL MENOS VARIOS CAMBIOS DE AMINOACIDO EN LA RT DEL VIH-1 (F61A, K65R, V75I, R78A, ETC) SON CAPACES DE AUMENTAR LA FIDELIDAD DE COPIA DE LA ENZIMA, SIN EMBARGO, CASI TODOS ESTOS ESTUDIOS SE HAN LLEVADO A CABO CON VARIANTES DERIVADAS DE VIRUS CLASIFICADOS COMO VIH-1 GRUPO M ¿ SUBTIPO B, RECIENTEMENTE HEMOS DEMOSTRADO QUE LA RT DE UNA CEPA FILOGENETICAMENTE ALEJADA DE LAS ANTERIORES (ESP49, CLASIFICADA COMO VARIANTE DE GRUPO O) PRESENTA UNA MAYOR TERMOESTABILIDAD QUE SUS HOMOLOGAS DE GRUPO M ¿ SUBTIPO B, ADEMAS DE POSEER UNA MAYOR FIDELIDAD DE COPIA (2¿5 VECES SUPERIOR EN ENSAYOS GENETICOS BASADOS EN LA EXPRESION DE LACZ), EL OBJETIVO DEL PROYECTO ES OBTENER UNA RT DEL VIH-1 GRUPO O MODIFICADA GENETICAMENTE, QUE POSEA UNA MAYOR FIDELIDAD DE COPIA Y ESTABILIDAD, Y QUE SEA MAS EFICIENTE EN ENSAYOS DE RT-PCR EN COMPARACION CON OTRAS RTS COMERCIALIZADAS O PREVIAMENTE CARACTERIZADAS; ADEMAS DE RESULTAR UTIL EN APLICACIONES BIOTECNOLOGICAS, PARA ALCANZAR ESTE OBJETIVO GENERAREMOS VARIANTES DE LA RT A TRAVES DE LA COMBINACION DE MUTACIONES DE LAS QUE SE TIENE CONSTANCIA DE QUE INDIVIDUALMENTE (Y EN OTROS CONTEXTOS DE SECUENCIA) AUMENTAN LA FIDELIDAD DE COPIA DE LA RT, ADEMAS, SE ESTUDIARA EL EFECTO DE MUTACIONES EN EL SUBDOMINIO CONECTOR Y EN EL DOMINIO RNASA H DE LA RT,E QUE AFECTAN A RESIDUOS QUE JUEGAN UN PAPEL IMPORTANTE EN INTERACCIONES ENTRE LAS SUBUNIDADES P66 Y P51 DE LA RT O ENTRE LA RT Y EL COMPLEJO MOLDE-INICIADOR, ESTOS CAMBIOS SE DISEÑARAN CON EL OBJETIVO DE REFORZAR LAS INTERACCIONES ENTRE SUBUNIDADES DE LA RT Y ENTRE LA POLIMERASA Y EL ACIDO NUCLEICO, LA TERMOSTABILIDAD DE LAS VARIANTES DE LA RT Y SU EFICACIA EN ENSAYOS DE RT-PCR SE DETERMINARA JUNTO CON SU FIDELIDAD EN REACCIONES DE POLIMERIZACION DE ADN EN PRESENCIA DE MOLDE ADN, SE COMPARARA SU CAPACIDAD PARA DISCRIMINAR ENTRE NUCLEOTIDOS CORRECTOS E INCORRECTOS MEDIANTE ENSAYOS ENZIMATICOS (ENSAYOS DE INCORPORACION ERRONEA Y DE EXTENSION DE EXTREMOS DESAPAREADOS) Y MEDIANTE ENSAYOS GENETICOS BASADOS EN LA EXPRESION DEL GEN LACZ, ESTOS ULTIMOS NOS PERMITIRAN OBTENER DATOS SOBRE SU CAPACIDAD PARA INTRODUCIR CAMBIOS EN LA PAUTA DE LECTURA DEBIDOS A INSERCIONES O DELECIONES DE UN NUCLEOTIDO (¿¿FRAMESHIFTS¿), O ¿HOT SPOTS¿ PARA DETERMINADOS TIPOS DE MUTACIONES, LA FIDELIDAD DE VARIANTES ESPECIFICAS DE LA RT DEL VIH-1 GRUPO O, SELECCIONADAS A LO LARGO DEL PROYECTO POR SUS PROPIEDADES DE TERMOSTABILIDAD Y ELEVADA FIDELIDAD DE COPIA EN REACCIONES DE POLIMERIZACION DEPENDIENTE DE ADN A 37ºC, SE DETERMINARA A TEMPERATURAS SUPERIORES (TIPICAMENTE EN EL RANGO 45-55 ºC) Y EN REACCIONES DE POLIMERIZACION EN PRESENCIA DE MOLDE ARN, TODO ELLO EN COMPARACION CON RTS DE USO HABITUAL EN BIOLOGIA MOLECULAR Y BIOMEDICINA, ver más
01/01/2010
CSIC
169K€
Perfil tecnológico estimado

Línea de financiación: concedida

El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2010-01-01
Presupuesto El presupuesto total del proyecto asciende a 169K€
Líder del proyecto
AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA... No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.
Perfil tecnológico TRL 2-3 552M