Descripción del proyecto
LOS VIRUS SE CONSIDERAN PIEZAS CLAVE EN EL FUNCIONAMIENTO DE LAS REDES TROFICAS MICROBIANAS Y DE LOS CICLOS BIOGEOQUIMICOS EN EL MAR, DESDE 1990, EL CONOCIMIENTO DE SU ABUNDANCIA, DINAMICA Y EFECTO EN LA MORTALIDAD BACTERIANA Y DE PROTISTAS HA IDO INCREMENTANDO, SIN EMBARGO, ESTOS ESTUDIOS SE CENTRAN EN TODA LA COMUNIDAD Y ES DIFICIL DETECTAR "IN SITU" LA ABUNDANCIA DE UN VIRUS CONCRETO Y LA INTERACCION ESPECIFICA CON SUS HOSPEDADORES, HASTA AHORA EL ESTUDIO DEL IMPACTO DE VIRUS EN COMUNIDADES MICROBIANAS SE HA HECHO DESDE UNA PERSPECTIVA DE "CAJA NEGRA", SIN CONOCER SU COMPOSICION ESPECIFICA, EL PROYECTO MEFISTO PRETENDE APLICAR METODOLOGIAS RECIENTES, BASADAS EN TINCIONES ESPECIFICAS DE VIRUS Y EN ANALISIS GENOMICOS Y METAGENOMICOS, PARA ESTUDIAR INTERACCIONES VIRUS-HOSPEDADOR CONCRETAS, ASI, EL MARCAJE DE VIRUS CON UN COLORANTE FLUORESCENTE (VIRALTAG) Y LA HIBRIDACION DE GENES VIRICOS CON SONDAS FLUORESCENTES (PHAGEFISH) PERMITEN DETECTAR LAS CELULAS MICROBIANAS INFECTADAS POR UN DETERMINADO VIRUS, EN EL CASO DE PHAGEFISH, SE PUEDEN TAMBIEN IDENTIFICAR LOS FAGOS LIBRES, SU REPLICACION Y ENCAPSIDACION, ADEMAS DE RECONOCER Y CUANTIFICAR LAS CELULAS HOSPEDADORAS DURANTE TODAS LAS ETAPAS DE LA INFECCION, ASIMISMO, LOS ANALISIS GENOMICOS Y METAGENOMICOS SON UTILES PARA DETECTAR GENES VIRICOS ESPECIFICOS EN GENOMAS DE BACTERIAS Y PICOEUCARIOTAS Y EN METAGENOMAS DE LA COMUNIDAD MICROBIANA, ESTO SE BASA EN LA DETECCION DE GENES VIRICOS EN MODELOS VIRUS-HOSPEDADOR CULTIVADOS Y, EN EL CASO DE LA DIVERSIDAD MICROBIANA NO CULTIVADA, EN LA PUESTA A PUNTO DE UN METODO PARA ANALIZAR LOS GENOMAS DE CELULAS INDIVIDUALES AISLADAS DIRECTAMENTE DEL MEDIO (AMPLIFICACION DEL GENOMA CELULAR, SAGS), ESTA APROXIMACION ES MUY PROMETEDORA PARA GRUPOS DONDE LA MAYORIA DE SUS MIEMBROS NO ESTAN CULTIVADOS, TALES COMO LOS PICOFLAGELADOS HETEROTROFICOS, DE LOS CUALES HAY MUY POCA INFORMACION,EL PROYECTO MEFISTO SE ESTRUCTURA EN DOS PARTES: 1) PONER A PUNTO DOS TECNICAS DE TINCION ESPECIFICA PARA SER IMPLEMENTADAS EN MODELOS VIRUS-HOSPEDADOR CULTIVADOS, ESTAS TECNICAS SE APLICARAN A MODELOS FAGO-BACTERIA (VIRALTAG Y PHAGEFISH), Y A MODELOS VIRUS-PICOEUCARIOTA (VIRALTAG), EN AMBOS CASOS EN EL LABORATORIO Y POSTERIOR APLICACION IN SITU PARA ANALIZAR EL IMPACTO EN UN CICLO ESTACIONAL, PARA ELLO USAREMOS VIRUS ESPECIFICOS CULTIVADOS Y SECUENCIADOS Y SUS CORRESPONDIENTES HOSPEDADORES AISLADOS DE LA BAHIA DE BLANES Y BANYULS-SUR MER, REPRESENTATIVOS DEL SISTEMA DE ESTUDIO Y MANTENIDOS EN CULTIVO EN EL ICM Y OOB, ADEMAS, A PARTIR DE GENOMAS SECUENCIADOS DE LOS VIRUS, SE SELECCIONARAN GENES VIRICOS ESPECIFICOS PARA DETECTARLOS EN METAGENOMAS GENERADOS EN CAMPAÑAS OCEANOGRAFICAS (MALASPINA Y TARAOCEANS),2) IDENTIFICACION DE GENES ESPECIFICOS DE VIRUS DE PICOEUCARIOTAS NO CULTIVADAS MEDIANTE EL ESTUDIO DE SU GENOMA SECUENCIADO A PARTIR DE LOS SAGS, UNA VEZ DETECTADOS LOS VIRUS ESPECIFICOS DE DETERMINADOS LINAJES DE PICOEUCARIOTAS, SE INVESTIGARA SU PRESENCIA EN METAGENOMAS GENERADOS EN LAS CAMPAÑAS MALASPINA Y TARAOCEANS, ESTA APROXIMACION PERMITIRA ESTIMAR EL IMPACTO DE LA INFECCION VIRAL EN LOS GRUPOS FILOGENETICOS PRINCIPALES QUE COMPONEN EL GRUPO FUNCIONAL DE PICOFLAGELADOS HETEROTROFICOS,EL OBJETIVO GLOBAL ES IDENTIFICAR Y CUANTIFICAR LAS INTERACCIONES VIRUS-HOSPEDADOR A NIVEL ESPECIFICO TANTO EN EL LABORATORIO COMO EN EL MAR, PARA DILUCIDAR EL PAPEL DE LOS VIRUS EN LAS REDES TROFICAS MICROBIANAS Y EN LOS CICLOS BIOGEOQUIMICOS, CULTIVOS\ VIRUS-HOSPEDADOR\ FAGOS\ BACTERIAS\ PICOEUCARIOTAS\ MARCAJE FLUORESCENTE\ FISH\ SAG (AMPLIFICACIÓN DEL GENOMA CELULAR)\ METAGENÓMAS\ MAR MEDITERRANEO