IDENTIFICACION DE LAS PROTEINAS DE UNION AL BOLSILLO BF3 DEL RECEPTOR DE ANDROGE...
IDENTIFICACION DE LAS PROTEINAS DE UNION AL BOLSILLO BF3 DEL RECEPTOR DE ANDROGENOS, REGULADOR ALOSTERICO DEL RECLUTAMIENTO DE COACTIVADORES AL BOLSILLO AF2
QUIERO DETERMINAR EL PAPER BIOLOGICO DE LA NUEVA SUPERFICIE REGULADORA EN EL DOMINIO DE UNION A HORMONA (LBD) DEL RECEPTOR DE ANDROGENOS (AR) LLAMADO BF3 (FUNCION 3 DE UNION), BF3 ES UN BOLSILLO HIDROFOBICO DE SUPERFICIE CONSTITUI...
QUIERO DETERMINAR EL PAPER BIOLOGICO DE LA NUEVA SUPERFICIE REGULADORA EN EL DOMINIO DE UNION A HORMONA (LBD) DEL RECEPTOR DE ANDROGENOS (AR) LLAMADO BF3 (FUNCION 3 DE UNION), BF3 ES UN BOLSILLO HIDROFOBICO DE SUPERFICIE CONSTITUIDO POR RESIDUOS DE LAS HELICES 1, EL LAZO ENTRE LA 3-4 Y LA HELICE 9 DEL LBD, BF3 ES DIFERENTE DE LOS BOLSILLOS DE UNION A HORMONA (LBP) Y DE UNION A COACTIVADORES (AF2), HAY NUMEROSAS MUTACIONES EN AR ASOCIADAS A CANCER DE PROSTATA Y SINDROMES DE INSENSITIVIDAD A ANDROGENOS, AR ES LA PRINCIPAL DIANA PARA LOS TRATAMIENTOS DE CANCER DE PROSTATA, NUMEROSAS INVESTIGACIONES INTENTAN DESARROLLAR NUEVOS ANTAGONISTAS DE LA ACCION DE AR: ANTIANDROGENOS PARA EL CANCER DE PROSTATA CON MENOS EFECTOS SECUNDARIOS QUE LOS ACTUALES, LOS ANTIANDROGENOS ACTUALES PIERDEN SU EFECTIVIDAD EN TRATAMIENTOS PROLONGADOS, SE NECESITAN ENCONTRAR NUEVAS VIAS DE MODULAR AR PARA LOS CASOS DE PACIENTES CON TUMORES REFRACTARIOS, VIMOS QUE BF3 ACTUA COMO MODULADOR DE AR EN CELULAS Y EN ENSAYOS BIOQUIMICOS SIENDO UNA DIANA LEGITIMA PARA SER ATACADA CON COMPUESTOS FARMACEUTICOS, EL POSIBLE PAPEL FISIOLOGICO DE BF3 SE HA PUESTO DE MANIFIESTO AL DESCUBRIR NUMEROSOS COMPUESTOS QUIMICOS QUE SE LE UNEN POR CRISTALOGRAFIA DE RAYOS X, BF3 ATRAE COMPUESTOS ORGANICOS QUE INDUCEN CAMBIOS CONFORMACIONALES EN BF3 QUE SE TRANSMITEN AL BOLSILLO DE AF2, AFECTANDO LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DE AR, BF3 ESTA MUTADO EN PACIENTES CON CANCER DE PROSTATA, ESTUDIOS DE MUTAGENESIS EN BF3 INDICAN QUE DIVERSOS RESIDUOS HACEN QUE AF2 RECLUTE CORRECTAMENTE LOS COACTIVADORES CONOCIDOS, EL OBJETIVO PRIMORDIAL DE LA INVESTIGACION QUE PROPONGO ES LA IDENTIFICACION DE LAS PROTEINAS QUE SE UNEN Y RECONOCEN BF3 IN VIVO Y ENTENDER COMO TALES INTERACCIONES AFECTAN LA ACTIVIDAD DE AR, CUANDO SE CONOZCAN LAS PROTEINAS REGULADORAS DE BF3 SE ABRIRAN NUEVAS LINEAS DE INVESTIGACION PARA MODULAR LA ACTIVIDAD DE AR Y QUIZAS CONFORMEN UNA NUEVA CLASE DE COACTIVADORES DE AR NO DESCRITOS PREVIAMENTE, MI SEGUNDO OBJETIVO ES RESOLVER SUS ESTRUCTURAS MOLECULARES POR CRISTALOGRAFIA DE RAYOS X, LOS OBJETIVOS PLANEADOS SON: A-IDENTIFICACION Y VALIDACION DE LAS PROTEINAS DE INTERACCION A BF3, EL OBJETIVO ES LA IDENTIFICACION DE LAS PROTEINAS DE UNION A BF3 EN EL AR LBD, SE UTILIZARAN ENSAYOS DE DOBLE HIBRIDO EN LEVADURAS (Y2H), UTILIZARE DIFERENTES CONSTRUCCIONES DE AR: COMPLETO MUTANTE DEL BOLSILLO AF2 Y/O CON MUTACIONES EN BF3, O BIEN SOLO LBD MUTANTE DE AF2 Y/O CON MUTACIONES EN BF3, LOS MUTANTES DE AF2 SON PARA NO IDENTIFICAR COACTIVADORES YA DESCRITOS CON ANTERIORIDAD Y LOS MUTANTES DE BF3 SERAN CONTROLES, LAS CONSTRUCCIONES DE AR SE USARAN DE ¿CEBO¿ PARA ¿PESCAR¿ LAS PROTEINAS DE INTERACCION A BF3 (¿PRESAS¿), LAS ¿PRESAS¿ ESTAN CODIFICADAS EN UNA LIBRERIA DE CDNA DE TEJIDO PROSTATICO U OTROS TEJIDOS QUE EXPRESAN AR (CEREBRO), SE COMPROBARA LA UNION DE LAS PROTEINAS IDENTIFICADAS MEDIANTE IMMUNOPRECIPITACION Y ENSAYOS EN CELULAS DE MAMIFERO (M2H), B-CRISTALIZACION Y DETERMINACION DE LA ESTRUCTURAS 3D DE LOS COMPLEJOS ENTRE AR LBD Y LAS PROTEINAS DE INTERACCION A BF3, QUIERO ELUCIDAR LOS DETERMINANTES ESTRUCTURALES Y ENTENDER COMO LAS PROTEINAS IDENTIFICADOS INTERACCIONAN Y SON RECLUTADOS POR LA SUPERFICIE BF3 Y ENTENDER COMO DICHAS INTERACCIONES MODULAN LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DE AR, COMO REQUISITO PRIMORDIAL SERA OBTENER CRISTALES CON BUENAS PROPIEDADES DE DIFRACCION, ESTAS PROTEINAS SE EXPRESARLAN Y PURIFICARAN PARA SER CRISTALIZADAS POR LAS TECNICAS DE DIFUSION POR VAPOR,ver más
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