Descripción del proyecto
YERSINIA RUCKERI ES EL AGENTE ETIOLOGICO DE LA ENFERMEDAD ENTERICA DE LA BOCA ROJA, PATOLOGIA QUE AFECTA PRINCIPALMENTE A SALMONIDOS, LOS MECANISMOS DE VIRULENCIA DE ESTA BACTERIA Y LOS FACTORES QUE LOS REGULAN AUN SON POCO CONOCIDOS, SE HA PODIDO ESTABLECER, EN Y, RUCKERI, QUE LA TEMPERATURA A LA QUE SE PRODUCEN LOS BROTES DE LA ENFERMEDAD (18ºC) Y LA EXISTENCIA DE UN AMBIENTE REDUCTOR, COMO EL QUE PUEDE EXISTIR EN ZONAS DEL INTESTINO DE LOS PECES, JUEGAN UN PAPEL RELEVANTE EN LA EXPRESION DE DETERMINADOS GENES DE VIRULENCIA, POR ELLO, EN ESTE PROYECTO SE PRETENDE IDENTIFICAR Y ESTUDIAR AQUELLOS GENES CUYA EXPRESION SE INDUCE A 18ºC (TEMPERATURA A LA QUE APARECEN LOS BROTES) Y NO A 28ºC (TEMPERATURA OPTIMA DE CRECIMIENTO) O BIEN EN CONDICIONES PROPIAS DE UNA ATMOSFERA REDUCTORA Y NO OXIDANTE, LOS RESULTADOS OBTENIDOS NO SOLO AMPLIARAN EL CONOCIMIENTO SOBRE LOS MECANISMOS DE VIRULENCIA DE Y, RUCKERI, SINO QUE TAMBIEN PODRAN AYUDAR A EXPLICAR OTROS PROCESOS INFECCIOSOS QUE SEAN CAUSADOS POR BACTERIAS INTESTINALES, O EN LOS QUE LA TEMPERATURA DE INFECCION SEA INFERIOR A LA OPTIMA DE CRECIMIENTO DE LA BACTERIA,EL ESTUDIO SE ABORDARA SIGUIENDO UNA ESTRATEGIA QUE INCLUYE LA CONSTRUCCION DEL PLASMIDO PUTMINI-TN5-LUXLAC-KM, PORTADOR DEL TRANSPOSON MINI-TN5-KM2, EN EL CUAL SE CLONARAN LOS OPERONES LUXCDABE (LUX) Y LACZY (LAC), AMBOS CARENTES TANTO DE PROMOTOR COMO DE TERMINADOR Y ORIENTADOS EN EL MIMO SENTIDO, ESTE VECTOR SE UTILIZARA PARA CONSTRUIR UNA GENOTECA DE MUTANTES POR TRANSPOSICION, EN MUCHOS DE ELLOS SE GENERARAN ADEMAS FUSIONES TRANSCRIPCIONALES ENTRE EL PROMOTOR DEL GEN INTERRUMPIDO Y LOS OPERONES LAC Y LUX, EL GEN LACZ POSIBILITARA LA IDENTIFICACION IN VITRO, MEDIANTE LA DETECCION DE UNA MAYOR ACTIVIDAD β-GALACTOSIDASA, DE AQUELLOS GENES CUYO NIVEL DE EXPRESION ESTE REGULADO POR LA TEMPERATURA (MAS A 18ºC QUE A 28ºC) Y POR LAS CONDICIONES REDOX (MAS EN ATMOSFERA REDUCTORA QUE OXIDANTE), EL DISEÑO EN TANDEM DE LOS OPERONES INDICADORES EN EL TRANSPOSON, PERMITIRA POSTERIORMENTE, EL SEGUIMIENTO IN VIVO DEL PROCESO INFECCIOSO Y LA LOCALIZACION Y CUANTIFICACION DE LA EXPRESION DE CADA GEN EN LOS TEJIDOS DEL PEZ, MEDIANTE LA EMISION DE LUZ POR LA ACTIVACION DEL OPERON LUX, FINALMENTE, LA UTILIZACION DE ESTE SISTEMA TIENE LA VENTAJA DE PODER ANALIZAR DIRECTAMENTE EL EFECTO QUE EJERCE LA MUTACION DE CADA UNO DE LOS GENES EN LA FISIOLOGIA Y VIRULENCIA DE LA BACTERIA, ADEMAS, CUANDO LA MUTACION AFECTE A UN GEN REGULADOR SE PODRA LLEVAR A CABO UN ANALISIS PROTEOMICO, EL PROYECTO SE BASA EN RESULTADOS PREVIOS, CONTRASTADOS Y BIEN ESTABLECIDOS, LLEVADOS A CABO EN DISTINTAS BACTERIAS, ASI COMO EN LOS OBTENIDOS POR EL GRUPO DE INVESTIGACION QUE PRESENTA ESTA MEMORIA, EN Y, RUCKERI, EL ESTUDIO PROPUESTO PUEDE APORTAR NUEVOS CONOCIMIENTOS, CON RELEVANCIA, NO SOLAMENTE EN EL AMBITO DE LA PATOGENIA DE Y, RUCKERI, SINO TAMBIEN EN EL DE OTRAS BACTERIAS DE INTERES MEDICO, VETERINARIO Y FITOSANITARIO, YERSINIA RUCKERI\VIRULENCE\TEMPERATURE\ATMOSFERA REDUCTORA