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AGL2015-66018-R

Financiado

DOBLE TRANSPOSICION CON GENES INDICADORES COMO HERRAMIENTA PARA LA IDENTIFICACIO...

DOBLE TRANSPOSICION CON GENES INDICADORES COMO HERRAMIENTA PARA LA IDENTIFICACION Y ANALISIS DE REGULADORES DE LA VIRULENCIA DE YERSINIA RUCKERI. YERSINA RUCKERI ES EL AGENTE ETIOLOGICO DE LA ENFERMEDAD ENTERICA DE LA BOCA ROJA, UNA PATOLOGIA FRECUENTE EN LA ACUICULTURA DE SALMONIDOS, DURANTE EL PROCESO INFECCIOSO DE ESTOS ANIMALES ECTOTERMOS, LA BACTERIA INDUCE GENES DE VI... ver más

01/01/2015

UNIOVI

206K€

Presupuesto del proyecto: 206K€

Líder del proyecto

Universidad de Oviedo No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

Total investigadores 787

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2015-01-01

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Participantes

UNIOVI

Lider

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Líder del proyecto

Universidad de Oviedo

Total investigadores 787

Presupuesto del proyecto 206K€

Descripción del proyecto YERSINA RUCKERI ES EL AGENTE ETIOLOGICO DE LA ENFERMEDAD ENTERICA DE LA BOCA ROJA, UNA PATOLOGIA FRECUENTE EN LA ACUICULTURA DE SALMONIDOS, DURANTE EL PROCESO INFECCIOSO DE ESTOS ANIMALES ECTOTERMOS, LA BACTERIA INDUCE GENES DE VIRULENCIA A TEMPERATURAS INFERIORES A LA DE SU CRECIMIENTO OPTIMO Y/O EN AMBIENTE REDUCTOR, TIPICO DE DETERMINADAS ZONAS DEL TRACTO INTESTINAL CON NIVELES RELEVANTES DE H2S, ESTO SIGNIFICA QUE DEBE DE HABER EN ESTE MICROORGANISMO Y POR EXTENSION, EN OTROS CON SIMILARES CARACTERISTICAS, MECANISMOS DE REGULACION DISTINTOS A LOS QUE SE DAN EN AQUELLOS PATOGENOS QUE AFECTAN A ANIMALES ENDOTERMOS DONDE LA INDUCCION DE LOS GENES DE VIRULENCIA OCURRE A UNA TEMPERATURA CERCANA A LA DE CRECIMIENTO OPTIMO (37ºC), DESTACAR RESPECTO A LA INDUCCION EN AMBIENTE REDUCTOR QUE HAY POCOS ESTUDIOS EN LOS QUE SE HAYA PUESTO EL FOCO EN COMO LAS CONDICIONES REDUCTORAS DEL INTESTINO PUEDEN INFLUIR EN LA EXPRESION DE GENES DE VIRULENCIA, EL PROYECTO QUE AQUI SE PRESENTA, PLANTEA UN DOBLE OBJETIVO: IDENTIFICAR NUEVOS SISTEMAS DE REGULACION DE GENES DE VIRULENCIA EN Y, RUCKERI COMO UN MODELO DE INFECCION DE ANIMALES ECTOTERMOS, EN PARTICULAR LOS DEPENDIENTES DE TEMPERATURA Y/O DE UNA ATMOSFERA REDUCTORA Y DETERMINAR QUE FACTORES FISICO-QUIMICOS REGULAN LA EXPRESION DE LOS PROPIOS GENES REGULADORES, LA ESTRATEGIA A SEGUIR PARTE DE UN CONJUNTO DE MUTANTES DE Y, RUCKERI EN GENES QUE SE INDUCEN ESPECIFICAMENTE A 18ºC (TEMPERATURA A LA QUE APARECEN LOS BROTES) Y NO A 28ºC (TEMPERATURA OPTIMA DE CRECIMIENTO) O EN CONDICIONES REDUCTORAS Y NO OXIDANTES COMO HABITUALMENETE SE REALIZA, TODOS ESTOS CLONES HAN SIDO OBTENIDOS MEDIANTE EL TRANSPOSON MINITN5-LUX-LAC, CUYA INTEGRACION EN EL GENOMA DE Y, RUCKERI GENERO MUTANTES CON FUSIONES TRANSCRIPCIONALES ENTRE EL PROMOTOR DEL GEN MUTADO Y LOS OPERONES LUXCDABE Y LACZY, EL PRIMER PASO EN EL DESARROLLO DEL NUEVO PROYECTO SUPONE LA OBTENCION DE UNA GENOTECA COMPUESTA POR MUTANTES EN CADA UNO DE LOS CLONES SELECCIONADOS UTILIZANDO UN SEGUNDO TRANSPOSON, MARINER HIMAR1, EN ESTA NUEVA GENOTECA PODRAN SER IDENTIFICADOS DOS TIPOS DE MUTANTES: AQUELLOS EN LOS QUE SE HAYA INTERRUMPIDO UN REGULADOR POSITIVO DEL GEN INDUCIDO POR BAJA TEMPERATURA O CONDICIONES REDUCTORAS, LO QUE SIGNIFICARA UNA DISMINUCION DE LA ACTIVIDAD B-GALACTOSIDASA Y DE LA LUMINISCENCIA EN LA CEPA DOBLE MUTANTE RESPECTO A LA CEPA MUTANTE DE PARTIDA; O BIEN, MUTANTES EN LOS QUE SE HAYA INTERRUMPIDO UN REGULADOR NEGATIVO DE DICHO GEN, EN CUYO CASO SE OBSERVARA EL EFECTO CONTRARIO, UN AUMENTO DE AMBAS ACTIVIDADES, ADEMAS, ESTE SEGUNDO TRANSPOSON (HIMAR1), SERA PORTADOR DE LOS GENES GUSA Y GFP EN TANDEM, AMBOS CARENTES TANTO DE PROMOTOR COMO DE TERMINADOR (HIMARI-GFP-GUSA), LO QUE PERMITIRA GENERAR FUSIONES TRANSCRIPCIONALES CON LOS GENES EN LOS QUE SE INSERTE Y PODER ASI ESTUDIAR SU REGULACION EN RESPUESTA A DIFERENTES CONDICIONES FISICO-QUIMICAS MEDIANTE LA CUANTIFICACION DE LA ACTIVIDAD B-GLUCURONIDASA (GUSA) O LA FLUORESCENCIA (GFP), EN DEFINITIVA, SE PRETENDE IMPLEMENTAR UNA ESTRATEGIA QUE PERMITA IDENTIFICAR NUEVOS REGULADORES DE LA VIRULENCIA Y A SU VEZ ESTUDIAR SIMULTANEAMENTE LA REGULACION DEL GEN REGULADOR Y DEL REGULADO, EL DESARROLLO DE LA PROPUESTA PUEDE APORTAR INFORMACION NOVEDOSA Y RELEVANTE SOBRE LA BIOLOGIA Y PATOGENIA DE Y, RUCKERI Y TAMBIEN Y CON CARACTER MAS UNIVERSAL, SOBRE LA DE OTRAS BACTERIAS CON HOSPEDADORES ECTOTERMICOS Y/O DE DESARROLLO INTESTINAL DE INTERES MEDICO Y VETERINARIO, ACUICULTURA\PATOLOGIA INFECCIOSA\YERSINIA RUCKERI\REGULATION\TEMPERATURA\REDOX\VIRULENCIA

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