Descripción del proyecto
LA ELIMINACION DE UN GEN MEDIANTE MUTAGENESIS DIRIGIDA (KNOCK-OUT, KO) PERMITE IDENTIFICAR SU FUNCION EN UN PROCESO BIOLOGICO DE FORMA INEQUIVOCA, LA MUTAGENESIS DIRIGIDA ERA DIFICIL DE LLEVAR A CABO EN ESPECIES GANADERAS, DIFICULTANDO EL ESTUDIO DE DISTINTOS PROCESOS, INCLUYENDO AQUELLOS QUE INTERVIENEN EN LA REPRODUCCION, SIN EMBARGO, EN UN PROYECTO PREVIO, HEMOS DESARROLLADO LA TECNOLOGIA CRISPR PARA GENERAR EMBRIONES BOVINOS KO, SIENDO ACTUALMENTE CAPACES DE UTILIZAR ESTA EXPERIENCIA ACUMULADA PARA DETERMINAR EL PAPEL DE GENES O RUTAS DE SEÑALIZACION ESPECIFICAS EN PROCESOS REPRODUCTIVOS, LOS FALLOS DURANTE LA ELONGACION DEL CONCEPTO, UNA EXTENSION DEL DESARROLLO PREIMPLANTACIONAL EXCLUSIVA DE UNGULADOS, SON RESPONSABLES DE LA MAYOR PARTE DE LAS PERDIDAS REPRODUCTIVAS EN UNGULADOS DE INTERES GANADERO, INCLUYENDO EL GANADO BOVINO, OVINO, CAPRINO Y PORCINO, EL CONCEPTO DEPENDE DE LOS COMPONENTES DEL FLUIDO UTERINO (FU) PARA SU CRECIMIENTO Y DESARROLLO, ENTRE LOS DISTINTOS COMPONENTES DEL FU, LOS COMPUESTOS LIPIDICOS PUEDEN JUGAR UN PAPEL NUTRICIONAL Y DE SEÑALIZACION, Y CONSTITUYEN UN NEXO ENTRE LAS ALTERACIONES METABOLICAS, COMO EL BALANCE ENERGETICO NEGATIVO DEL PERIODO POSTPARTO DEL GANADO VACUNO LECHERO, Y LA INFERTILIDAD, EN UN PRIMER OBJETIVO DETERMINAREMOS EL PAPEL DE LA SEÑALIZACION MEDIADA POR PPARG, UN TRANSDUCTOR PRINCIPAL DE LA SEÑALIZACION LIPIDICA EN EL CONCEPTO, EVALUANDO LA CAPACIDAD DE DESARROLLO DE EMBRIONES BOVINOS KO PARA PPARG, ADEMAS, SE REALIZARA UN ANALISIS DE LA COMPOSICION LIPIDICA DEL FU PARA IDENTIFICAR POSIBLES LIGANDOS DE PPARG Y PROSTANOIDES PRESENTES EN EL FU DURANTE LA ELONGACION, LOS PROSTANOIDES SECRETADOS POR EL CONCEPTO PUEDEN ACTUAR DE FORMA PARACRINA O AUTOCRINA DURANTE LA ELONGACION, PARA IDENTIFICAR SU FUNCION, EVALUAREMOS EL EFECTO DE LA ADICION DE ACIDO ARAQUIDONICO, EL PRECURSOR DE TODOS LOS PROSTANOIDES, AL MEDIO DE CULTIVO EN EL QUE SE DESARROLLAN EMBRIONES Y CONCEPTOS BOVINOS SOBRE LAS TASAS DE DESARROLLO Y LA TRANSCRIPCION DE GENES RELACIONADOS CON LA SINTESIS Y SEÑALIZACION DE LOS PROSTANOIDES, A CONTINUACION, EVALUAREMOS LA CAPACIDAD DE DESARROLLO DE EMBRIONES BOVINOS EN LOS QUE SE HA ELIMINADO LA ENZIMA FUNDAMENTAL PARA LA SINTESIS DE PROSTANOIDES (PTGS2), EL FIN DE ESTOS EXPERIMENTOS ES CONOCER LA SEÑALIZACION LIPIDICA QUE TIENE LUGAR DURANTE LA ELONGACION DEL CONCEPTO PARA PODER DESARROLLAR ESTRATEGIAS DE BASE FARMACOLOGICA O NUTRICIONAL QUE PUEDAN REDUCIR LAS PERDIDAS EMBRIONARIAS DURANTE ESTE PERIODO DEL DESARROLLO, UN ULTIMO OBJETIVO PLANEA IDENTIFICAR EL GEN IMPLICADO EN LA INFERTILIDAD DE TOROS ASOCIADA A LA PRESENCIA HOMOCIGOTICA DE UN FRAGMENTO CROMOSOMICO EXTENSO EN TOROS FLECKVIEH INFERTILES, ENTRE LOS GENES PRESENTES EN ESTE FRAGMENTO, TMEM95 PUEDE JUGAR UN PAPEL ESENCIAL EN LA FUNCION ESPERMATICA, PARA DETERMINAR SI LA PERDIDA DE DICHO GEN ES LA CAUSANTE DE INFERTILIDAD, SE GENERARA UN MODELO KO PARA TMEM95 EN RATONES, LA IDENTIFICACION DE TMEM95 COMO UN GEN ESENCIAL PARA LA FERTILIDAD DEL MACHO LO SEÑALARIA COMO CANDIDATO PARA IDENTIFICAR MUTACIONES CAUSANTES DE INFERTILIDAD EN OTRAS LINEAS GENETICAS BOVINAS O INCLUSO EN OTRAS ESPECIES DE INTERES GANADERO, CRISPR\BOVINO\EMBRIÓN\INFERTILIDAD\REPRODUCCIÓN