Descripción del proyecto
A PESAR DE LAS IMPORTANTES MEJORAS INTRODUCIDAS EN EL CULTIVO DE EMBRIONES, CIERTAMENTE EL PASO POR EL TRACTO GENITAL CONFIERE AL EMBRION MAYOR VIABILIDAD Y SUPERVIVENCIA A LA CRIOPRESERVACION EN COMPARACION CON LOS BLASTOCISTOS PRODUCIDOS ENTERAMENTE IN VITRO, LA INTERACCION ENTRE EL EMBRION Y EL MEDIO MATERNO DETERMINA LA SOSTENIBILIDAD REPRODUCTIVA Y LA SALUD DE LA PROGENIE, TANTO EN LAS ESPECIES DOMESTICAS COMO EN LA HUMANA, LA MADRE PROPORCIONA UN AMBIENTE APROPIADO DURANTE EL DESARROLLO TEMPRANO, DE TAL FORMA QUE LAS NECESIDADES DE LOS EMBRIONES SE VEAN SATISFECHAS, DENTRO DEL MICROAMBIENTE QUE RODEA AL JOVEN EMBRION DURANTE LOS ESTADIOS INICIALES DE LA VIDA OVIDUCTAL Y UTERINA, EL PAPEL DE LAS PROTEINAS SEGREGADAS POR EL TRACTO GENITAL Y SU INTERACCION CON EL EMBRION NO HAN SIDO SUFICIENTEMENTE ESTUDIADOS EN LA ESPECIE BOVINA, ESTAS PROTEINAS PUEDEN APORTAR MEJORAS A LOS SISTEMAS DE CULTIVO IN VITRO, DE TAL MODO QUE UN MAYOR REFLEJO DE LAS CONDICIONES MATERNALES CONDUZCA A MEJORES VIABILIDAD EMBRIONARIA Y SALUD DE LA PROGENIE, LOS REQUERIMIENTOS DEL EMBRION A LO LARGO DEL DESARROLLO HASTA BLASTOCISTO SON CAMBIANTES, POR TANTO, EL PERIODO DE DESARROLLO TEMPRANO IN VIVO (HOMOLOGO EN LA PRACTICA AL PERIODO DE CULTIVO IN VITRO) DEBE SER SUBDIVIDIDO PARA SU ESTUDIO, ADEMAS EXISTEN NOTABLES DIFERENCIAS GENETICAS Y EPIGENETICAS ENTRE EMBRIONES DE SEXO MASCULINO Y FEMENINO, LO QUE CONDUCE A FENOTIPOS BIEN DISTINTOS, CON RASGOS METABOLICOS Y FUNCIONALES PROPIOS DE CADA SEXO, ESTAS DIFERENCIAS, QUE SE OBSERVAN EN EL ANIMAL VIVO Y TAMBIEN EN CULTIVOS DE EMBRIONES IN VITRO, SUGIEREN QUE LOS EMBRIONES MASCULINOS Y FEMENINOS PUEDEN INTERACTUAR CON EL TRACTO MATERNO DE ACUERDO CON SU SEXO, LA EXPRESION DEL SEXO DEL EMBRION NO TENDRIA LUGAR ANTES DE LA ACTIVACION DEL GENOMA EMBRIONARIO (8-16 CELULAS EN BOVINO), POR LO QUE EL ESTUDIO DEL SEXO DEL EMBRION EN EL OVIDUCTO NO ES OPORTUNO, LA ACTUAL TECNOLOGIA DE PRODUCCION DE SEMEN SEXADO MEDIANTE CITOMETRIA DE FLUJO PERMITE OBTENER EMBRIONES DEL SEXO DESEADO MEDIANTE FERTILIZACION IN VITRO, Y ES RAZONABLE QUE EN LA FORMULACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SE TENGA EN CUENTA EL SEXO DEL EMBRION CULTIVADO, EL PRESENTE PROYECTO ANALIZARA EL PROTEOMA DEL EMBRION Y DEL FLUIDO UTERINO POR ELECTROFORESIS DIFERENCIAL BIDIMENSIONAL (DIGE) ACOPLADA A ESPECTROMETRIA DE MASAS (MS), PARA ACREDITAR EL ORIGEN MATERNAL DE LAS PROTEINAS DE INTERES SELECCIONADAS Y DESCARTAR SU ORIGEN EMBRIONARIO SE INVESTIGARA LA PRESENCIA DEL MRNA CORRESPONDIENTE (RT-PCR E HIBRIDACION IN SITU) Y DE LA PROPIA PROTEINA (INMUNOCITOQUIMICA) EN EMBRIONES Y ENDOMETRIO, EL PERIODO ANALIZADO COMPRENDERA LOS DIAS 4 A 8 EN UTERO, EN CORRESPONDENCIA CON LAS ETAPAS DE MAYOR COMPLEJIDAD EN EL CULTIVO IN VITRO, E INCLUYENDO ESTADIOS EMBRIONARIOS TRANSFERIBLES A RECEPTORAS, POR ULTIMO, LA FUNCION DE LAS PROTEINAS DE ORIGEN MATERNAL SELECCIONADAS SERA ANALIZADA DURANTE EL DESARROLLO EMBRIONARIO IN VITRO, DESARROLLO EMBRION BOVINO SEXO PROTEOMA