Descripción del proyecto
EL CICLO REPLICATIVO DE LOS VIRUS DEPENDE CRITICAMENTE DE SU INTERACCION CON DIVERSAS MEMBRANAS DE LA CELULA HUESPED, LA INTERACCION DE PROTEINAS VIRALES CON MEMBRANAS CELULARES ES FUNDAMENTAL EN EL PROCESO DE ENTRADA DE LOS VIRUS, TANTO DURANTE SU ADSORCION A RECEPTORES CELULARES DE LA SUPERFICIE CELULAR COMO EN SU PENETRACION A TRAVES DE LA MEMBRANA PLASMATICA O ENDOSOMAL, ADEMAS, MUCHOS VIRUS INTERACCIONAN CON MEMBRANAS CELULARES DURANTE LA REPLICACION DE SUS GENOMAS, EL ENSAMBLAJE DE LOS VIRUS PROGENIE Y LA LIBERACION DE LAS PARTICULAS VIRALES DE LA CELULA INFECTADA,EL PRESENTE PROYECTO PRETENDE CONTRIBUIR AL CONOCIMIENTO DE LOS MECANISMOS MOLECULARES Y ESTRUCTURALES DE ESTE TIPO DE INTERACCIONES UTILIZANDO COMO MODELO EL VIRUS DE LA PESTE PORCINA AFRICANA (VPPA), UN VIRUS DE GRAN INTERES BIOLOGICO Y RELEVANCIA EN SANIDAD ANIMAL, ASIN PROPONEMOS ESTUDIAR ASPECTOS CONCRETOS DE ETAPAS CLAVE COMO LA ENTRADA, EL ENSAMBLAJE Y SALIDA DEL VPPA DE LA CELULA INFECTADA, LA DILUCIDACION DE ESTOS MECANISMOS PUEDE CONTRIBUIR SIGNIFICATIVAMENTE AL DESARROLLO DE ESTRATEGIAS QUE PERMITAN BLOQUEAR LA INFECCION Y SU DISEMINACION, EN PRIMER LUGAR SE ANALIZARA EL PROCESO DE ENTRADA, ESTO ES, LA ADSORCION, ENDOCITOSIS Y FUSION DE LAS DOS FORMAS INFECTIVAS DEL VPPA, LA FORMA INTRACELULAR, CON UNA MEMBRANA LIPIDICA, Y LA FORMA EXTRACELULAR, CON UNA SEGUNDA MEMBRANA OBTENIDA POR GEMACION DE LA MEMBRANA PLASMATICA, TAMBIEN ESTUDIAREMOS EL PAPEL DE DOS PROTEINAS VIRALES, PE199L Y PE248R, EN EL PROCESO DE FUSION QUE DETERMINA LA PENETRACION DEL GENOMA VIRAL DESDE LAS VESICULAS ENDOCITICAS AL CITOPLASMA DE LA CELULA HUESPED,EN SEGUNDO LUGAR ESTUDIAREMOS EL PROCESO DE MORFOGENESIS VIRAL QUE TIENE LUGAR EN LOS SITIOS DE ENSAMBLAJE CITOPLASMATICOS, EN LAS FACTORIAS VIRALES EL VPPA ADQUIERE SU ENVUELTA INTERNA A TRAVES DE UN COMPLEJO MECANISMO, DESCONOCIDO EN BUENA MEDIDA, QUE IMPLICA EL RECLUTAMIENTO Y LA CONVERSION DE CISTERNAS DEL RETICULO ENDOPLASMICO EN MEMBRANAS VIRALES, ESTUDIAREMOS ESTE MECANISMO MEDIANTE EL EMPLEO DE UN VIRUS RECOMBINANTE INDUCIBLE EN LA PROTEINA DE LA ENVUELTA INTERNA P54, ESENCIAL EN ESTE PROCESO,FINALMENTE, ABORDAREMOS EL ESTUDIO DEL PAPEL EN LA INFECCION DE LA MOLECULA DE ADHESION CD9, UNA TETRASPANINA CELULAR RECLUTADA SELECTIVAMENTE POR EL VPPA DURANTE SU SALIDA POR GEMACION DE LA MEMBRANA PLASMATICA, CD9 Y OTRAS TETRASPANINAS HAN SIDO RECIENTEMENTE IMPLICADAS EN EL PROCESO DE SALIDA DE HIV-1 Y OTROS VIRUS,PARA LA REALIZACION DE ESTE PROYECTO EMPLEAREMOS TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR COMO LA CONSTRUCCION DE VIRUS LETALES CONDICIONALES PARA LA EXPRESION INDUCIBLE DE PROTEINAS VIRALES, ASIMISMO, IMPLEMENTAREMOS DIFERENTES METODOLOGIAS DE MICROSCOPIA COMO LA MICROSCOPIA CORRELATIVA (OPTICO-ELECTRONICA) MEDIANTE EL EMPLEO DE PROTEINAS RECOMBINANTES CON ¿TAGS¿ FLUORESCENTES Y ELECTRONDENSOS, MORFOGENESIS VIRAL\ENTRADA DE VIRUS\INTERACCION VIRUS-HUESPED\MICROSCOPIA ELECTRONICA