Descripción del proyecto
ANTECEDENTES. LOS BIOCIDAS (DESINFECTANTES, DESCONTAMINANTES Y ADITIVOS) SON COMPUESTOS DE USO CRECIENTE EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA. RECIENTES NORMATIVAS EUROPEAS EXIGEN LA EVALUACION (O RE-EVALUACION) DE LOS BIOCIDAS CON ANTERIORIDAD A SU AUTORIZACION. SIN EMBARGO, DIFERENTES COMITES CIENTIFICOS DE LA UNION EUROPEA (EFSA, SCENIHR, SCHER-SCENIHR) HAN SEÑALADO QUE LOS DATOS ACTUALMENTE DISPONIBLES SON INSUFICIENTES PARA REALIZAR UNA CORRECTA EVALUACION CIENTIFICA EN RELACION CON LA SEGURIDAD DE ESTOS COMPUESTOS PARA EL CONSUMIDOR, Y HAN ENFATIZADO LA NECESIDAD DE OBTENER DADOS ADICIONALES A LOS EXISTENTES (INCLUYENDO LOS RELATIVOS A RIESGOS BIOLOGICOS, POR EJEMPLO LA POTENCIALIDAD DE ADAPTACIONES Y ADAPTACIONES CRUZADAS O LA CAPACIDAD DE LOS BIOCIDAS PARA GENERAR RESISTENCIAS A ANTIBIOTICOS).OBJETIVOS. EL OBJETIVO PRINCIPAL (OP) DE ESTE PROYECTO DE INVESTIGACION ES DETERMINAR SI LA EXPOSICION DE SALMONELLA ENTERICA A DOSIS SUBINHIBITORIAS DE BIOCIDAS PERMITE LA ADAPTACION DE LAS CEPAS, Y SI ESTA ADAPTACION TIENE CONSECUENCIAS NEGATIVAS PARA LA SEGURIDAD ALIMENTARIA, INCREMENTANDO: A) LA TOLERANCIA A OTROS BIOCIDAS (ADAPTACION CRUZADA), B) LA RESISTENCIA DE LAS CEPAS A CONDICIONES DE ACIDEZ EXTREMA, C) LA RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS O D) LA CAPACIDAD PARA FORMAR BIOFILMS. LOS OBJETIVOS SECUNDARIOS (OS) SON: 1) COMPARAR LA CAPACIDAD DE ADAPTACION A BIOCIDAS DE 60 CEPAS DE SALMONELLA DE DIFERENTE SEROTIPO O FAGOTIPO; 2) INVESTIGAR LOS MECANISMOS DE ADAPTACION Y 3) COMPARAR TRES TECNICAS DIFERENTES PARA EL ESTUDIO DE LOS BIOFILMS.METODOS. SESENTA CEPAS DE S. ENTERICA (NUEVE SEROTIPOS; NUEVE FAGOTIPOS) SERAN EXAMINADAS, ANTES Y DESPUES DE LA EXPOSICION A CONCENTRACIONES CRECIENTES SUB-INHIBITORIAS DE SEIS BIOCIDAS (HIPOCLORITO SODICO, CLORURO DE BENZALCONIO, NITRITO SODICO, ACIDO ACETICO, ACIDO LACTICO Y FOSFATO TRISODICO), PARA DETERMINAR LA CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA (CMI) DE LOS BIOCIDAS (OP-A Y OS-1). SE SELECCIONARAN LAS 10-15 CEPAS MAS FUERTEMENTE ADAPTADAS PARA DETERMINAR LA FLUIDEZ DE SUS MEMBRANAS (ANISOTROPIA DE LA FLUORESCENCIA), SU COMPOSICION DE ACIDOS GRASOS, SU ACTIVIDAD ENZIMATICA (DESCARBOXILASAS), LA ACTIVIDAD DE LAS BOMBAS DE EXPULSION Y LA EXPRESION DEL GEN RPOS (OS-2). TAMBIEN SE ESTUDIARAN LAS TASAS DE SUPERVIVENCIA EN CONDICIONES DE ACIDEZ EXTREMA (OP-B) Y LOS PATRONES DE RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS (OP-C). LA FORMACION DE BIOFILMS SE EVALUARA USANDO TRES TECNICAS DIFERENTES: TINCION CON CRISTAL VIOLETA, MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO Y MICROSCOPIO LASER CONFOCAL (OP-D Y OS-3). ALMONELLA ENTERICA\SEGURIDAD ALIMENTARIA\BIOFILMS\RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS\RESPUESTA AL ESTRES ACIDO\BIOCIDAS\ADAPTACION