Descripción del proyecto
LAS TECNICAS MICROSCOPICAS DE IMAGEN AVANZADAS SON METODOS DE ELECCION PARA COMPRENDER LAS INTERACCIONES MOLECULARES Y LA DINAMICA DE SEGUNDOS MENSAJEROS E IONES EN EL AMBIENTE FISIOLOGICO DEL INTERIOR CELULAR, ADEMAS, TIENEN BUENA RESOLUCION ESPACIAL Y TEMPORAL, Y POR ELLO COMPLEMENTAN LAS TECNICAS GENETICAS Y BIOQUIMICAS ESTANDAR, SE HAN CONSEGUIDO GRANDES AVANCES EN MARCADORES FLUORESCENTES CODIFICADOS GENETICAMENTE, Y METODOS ESPECTROSCOPICOS, COMO LA TRANSFERENCIA DE ENERGIA RESONANTE DE FORSTER (FRET), SE HAN APLICADO A LA MICROSCOPIA PARA ESTIMAR LA PROXIMIDAD MOLECULAR, UTILIZAREMOS ESTOS FLUOROCROMOS Y NUESTRA PROPIA CARACTERIZACION METODOLOGICA DE LOS ULTIMOS AÑOS PARA OBTENER DATOS RELEVANTES EN TRES PARADIGMAS BIOLOGICOS, PRIMERO, CONTINUAREMOS DESARROLLANDO INDICADORES DE CA2+ LUMINISCENTES BASADOS EN LA FUSION DE UNA PROTEINA FLUORESCENTE (FP) CON LA FOTOPROTEINA ECUORINA, EL OBJETIVO ES CAMBIAR LA LUMINISCENCIA AZUL DE LA ECUORINA EN EMISION ROJA GRACIAS A LA TRANSFERENCIA DE ENERGIA QUIMIOLUMINISCENTE, LA EMISION NARANJA O ROJA AUMENTARA LA PENETRACION TISULAR DE LA LUZ, Y AÑADIRA NUEVOS COLORES PARA ESTUDIOS DE CA2+ EN VARIOS CANALES SIMULTANEAMENTE, CON ESTOS INDICADORES SE HARAN REGISTROS FISIOLOGICOS EN EXPLANTES DE RETINA DE RATON, SEGUNDO, DESARROLLAREMOS SENSORES PARA ACTIVIDAD DE LA PROTEASA NS3 DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C (HCV) EN CELULAS DE MAMIFERO, COMPUESTOS DE UNA FP (DONADOR DE ENERGIA), SEGUIDA DE UN PEPTIDO QUE CONTENGA EL SITIO CONSENSO DE CORTE DE LA PROTEASA NS3, Y DE OTRA FP (ACEPTORA DE FRET), LA PROTEOLISIS DEL PEPTIDO RESULTARA EN LA ABOLICION DE LA SEÑAL FRET, QUE SERA INVERSAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACION DE LA PROTEASA, TERCERO, HAREMOS MEDIDAS DE INTERACCION MOLECULAR ENTRE FORMAS TOPOLOGICAS SIMPLES DE LA PROTEINA PRIONICA CELULAR (PRPC) Y ESTUDIOS DE SU TOPOLOGIA, CON EL FIN DE OBTENER DATOS QUE PERMITAN ESTABLECER IMPORTANTES RELACIONES ESTRUCTURA-FUNCION, DEBIDO A QUE LOS METODOS DE CUANTIFICACION DE ESTAS TRES LINEAS DE ESTUDIO ESTAN MUY RELACIONADOS, LOS AVANCES EN CADA UNA DE ELLAS BENEFICIARAN A LAS OTRAS LINEAS, ACTUALIZAREMOS FLUOROCROMOS, TECNICAS DE MEDIDA E INSTRUMENTACION DURANTE LA DURACION DEL PROYECTO, YA QUE ESTE CAMPO MULTIDISCIPLINAR ESTA MOSTRANDO UNA RAPIDA PROGRESION EN LOS ULTIMOS AÑOS, FRET\GFP\BRET\interacción proteína-proteína\proteasa HCV\ecuorina\PrP\imagen en célula viva\fluorescencia\quimioluminiscencia