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BFU2012-39548-C02-01

Financiado

ESTUDIOS IN VITRO E IN VIVO DE LA DINAMICA DE CALCIO Y ACIDO FOSFATIDICO MEDIANT...

ESTUDIOS IN VITRO E IN VIVO DE LA DINAMICA DE CALCIO Y ACIDO FOSFATIDICO MEDIANTE INDICADORES RECOMBINANTES LUMINISCENTES Y FLUORESCENTES. LAS TECNICAS DE IMAGEN DE FLUORESCENCIA SON OPTIMAS PARA VISUALIZAR LA DINAMICA ESPACIO-TEMPORAL DE SEGUNDOS MENSAJEROS Y BIOMOLECULAS EN CELULAS VIVAS. UTILIZAREMOS PROTEINAS QUIMERICAS CONSTRUIDAS CON PROTEINAS FLUORESCENTES CAP... ver más

01/01/2012

UCLM

111K€

Presupuesto del proyecto: 111K€

Líder del proyecto

UNIVERSIDAD DE CASTILLA-LA MANCHA No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

Total investigadores 2583

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2012-01-01

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Participantes

UCLM

Lider

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Líder del proyecto

UNIVERSIDAD DE CASTILLA-LA MANCHA

Total investigadores 2583

Presupuesto del proyecto 111K€

Descripción del proyecto LAS TECNICAS DE IMAGEN DE FLUORESCENCIA SON OPTIMAS PARA VISUALIZAR LA DINAMICA ESPACIO-TEMPORAL DE SEGUNDOS MENSAJEROS Y BIOMOLECULAS EN CELULAS VIVAS. UTILIZAREMOS PROTEINAS QUIMERICAS CONSTRUIDAS CON PROTEINAS FLUORESCENTES CAPACES DE PRODUCIR TRANSFERENCIA DE ENERGIA RESONANTE (RET, RESONANCE ENERGY TRANSFER) TRAS LA UNION DE LAS MOLECULAS DE SEÑALIZACION, PARA ABORDAR DOS OBJETIVOS.EL PRIMER OBJETIVO ES CONTINUACION DEL PROYECTO MICINN ANTERIOR Y CONSISTE EN COMPLETAR LA CARACTERIZACION DE SENSORES BIOLUMINISCENTES PARA CALCIO QUE HEMOS DESARROLLADO (FUSIONES PROTEINA_FLUORESCENTE_ROJA-ECUORINA, PLOS ONE 6: E19520, 2011), Y UTILIZARLOS EN MODELOS FISIOLOGICOS ADECUADOS, COMO RETINA DE MAMIFERO. DEBIDO A QUE LOS SENSORES SE HAN MODIFICADO PARA OBTENER LA MAXIMA EMISION EN LA BANDA ROJA DEL ESPECTRO, CON MINIMA ABSORCION Y DISPERSION POR LOS TEJIDOS, SON OPTIMOS PARA SU USO EN MODELOS ANIMALES EN EXPERIMENTOS DE IMAGING IN VIVO. SE HARAN ESTUDIOS DE PRUEBA DE CONCEPTO DURANTE EL DESARROLLO EMBRIONARIO DEL PEZ CEBRA.EL SEGUNDO OBJETIVO CONSISTE EN CONTINUAR EL DESARROLLO DE UN SENSOR FLUORESCENTE PARA VISUALIZAR LA FORMACION DEL FOSFOLIPIDO ACIDO FOSFATIDICO (PA) EN CELULAS VIVAS. EL PA TIENE FUNCIONES DE SEÑALIZACION ADEMAS DE SU PAPEL ESTRUCTURAL EN LAS MEMBRANAS, PERO LOS ASPECTOS DINAMICOS DE SU GENERACION NO SE CONOCEN BIEN. EL SENSOR QUE PROPONEMOS PERMITIRA ANALIZAR LA PRODUCCION DE PA CON BUENA RESOLUCION ESPACIAL Y TEMPORAL. SE UTILIZARA COMO DOMINIO SENSIBLE A PA UN FRAGMENTO DE LA PROTEINA T-SNARE DE LEVADURA SPO20, CUYA UNION ESPECIFICA A ESTE FOSFOLIPIDO SE HA DEMOSTRADO. SPO20 SE FUSIONARA A LAS PROTEINAS FLUORESCENTES ECFP Y VENUS (CON EMISION AZUL Y AMARILLA, RESPECTIVAMENTE), DE FORMA QUE LA UNION A PA RESULTE EN UN CAMBIO EN LA TRANSFERENCIA DE ENERGIA RESONANTE ENTRE AMBAS. SE COMPARARAN ESTOS SENSORES CON DOMINIOS DE UNION A PA DERIVADOS DE OTRAS PROTEINAS. SE UTILIZARA EL SENSOR PARA CARACTERIZAR LOS NIVELES DE PA EN REPOSO Y SUS CAMBIOS EN RESPUESTA A ESTIMULOS EN SISTEMAS MODELO DE INTERES FISIOLOGICO.

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