Descripción del proyecto
LA REGULACION REDOX TIOL-DEPENDIENTE, EN LA QUE LAS TIORREDOXINAS (TRXS) SON MUY IMPORTANTES, PERMITE LA MODULACION RAPIDA DE LA ACTIVIDAD DE UN GRAN NUMERO DE ENZIMAS, MIENTRAS LOS ORGANISMOS HETEROTROFOS CONTIENEN 2-3 TRXS Y UTILIZAN NADPH COMO PODER REDUCTOR VIA UNA TRX REDUCTASA DEPENDIENTE DE NADPH (NTR), LOS CLOROPLASTOS TIENEN UN ELEVADO NUMERO DE TRXS Y UTILIZAN FERREDOXINA (FDX) REDUCIDA FOTOSINTETICAMENTE VIA UNA TRX REDUCTASA DEPENDIENTE DE FDX (FTR) COMO FUENTE DE PODER REDUCTOR, POR TANTO, EL SISTEMA FTR/TRXS RELACIONA LA REGULACION REDOX DEL CLOROPLASTO A LA LUZ, MAS RECIENTEMENTE, NUESTRO GRUPO IDENTIFICO UNA NUEVA NTR CON UN DOMINIO TRX EN SU EXTREMO C-TERMINAL, NTRC, EXCLUSIVA DE ORGANISMOS FOTOSINTETICOS Y LOCALIZACION PLASTIDIAL, NTRC REDUCE MUY EFICIENTEMENTE A LAS 2-CYS PEROXIRREDOXINAS (PRXS) POR LO QUE SE PROPUSO QUE TENIA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE, SIN EMBARGO, ESTUDIOS POSTERIORES MUESTRAN LA PARTICIPACION DE NTRC EN PROCESOS CLOROPLASTIDICOS COMO LAS REACCIONES FOTOQUIMICAS DE LA FOTOSINTESIS Y RUTAS METABOLICAS TAN IMPORTANTES COMO LA BIOSINTESIS DE ALMIDON Y CLOROFILA, POR TANTO, ESTA BIEN ESTABLECIDO QUE LA REGULACION REDOX DEL CLOROPLASTO DEPENDE DE DOS SISTEMAS, NTRC Y FTR/TRXS, SIENDO UNA CUESTION RELEVANTE SI EXISTE INTERRELACION ENTRE ELLOS, EN EL PROYECTO ACTUALMENTE EN VIGOR HEMOS OBSERVADO QUE MUTANTES DE ARABIDOPSIS QUE COMBINAN LA FALTA DE NTRC CON LA DE TRXS NO RELACIONADAS FUNCIONALMENTE (X, F, O M), TIENEN UN FENOTIPO MUY SEVERO, INDICANDO QUE LA PRESENCIA DE NTRC ES NECESARIA PARA LA FUNCION DE ESTAS TRXS, POR OTRO LADO, EL HECHO DE QUE MUTANTES SIN NTRC Y CON BAJOS NIVELES DE 2-CYS PRXS RECUPEREN EL FENOTIPO SILVESTRE NOS HA LLEVADO A PROPONER QUE EL BALANCE REDOX DE LAS 2-CYS PRXS, REGULADO POR NTRC, CONTROLA LA ACTIVIDAD DE LAS TRXS Y, POR TANTO, EL METABOLISMO FOTOSINTETICO DEL CLOROPLASTO, SE CONOCE CON BASTANTE DETALLE EL MECANISMO DE ACTIVACION METABOLICA EN RESPUESTA A LUZ MEDIANTE LA REDUCCION DE ENZIMAS, DURANTE LA NOCHE ESTAS ENZIMAS SE DESACTIVAN POR OXIDACION EN UN PROCESO MUY RAPIDO Y CUYO MECANISMO ES DESCONOCIDO, SIENDO UNA DE LAS CUESTIONES SIN RESOLVER MAS RELEVANTES EN EL CAMPO DE LA BIOLOGIA REDOX DEL CLOROPLASTO, NUESTRO MODELO SUGIERE QUE LAS 2-CYS PRXS PODRIAN PARTICIPAR EN ESTE MECANISMO, EL PROYECTO COORDINADO QUE PROPONEMOS SE BASA EN ESTOS RESULTADOS Y PRETENDE PROFUNDIZAR EN EL CONOCIMIENTO DEL CONTROL DE LA HOMEOSTASIS REDOX DEL CLOROPLASTO POR EL SISTEMA NTRC/2-CYS PRXS, PARA ELLO ESTUDIAREMOS SI ESTE SISTEMA CONTROLA TODOS LOS PROCESOS DEL CLOROPLASTO REGULADOS POR TRXS Y TRATAREMOS DE ESTABLECER SI LA DESACTIVACION OXIDATIVA DEL METABOLISMO CLOROPLASTIDICO DURANTE LA NOCHE ESTA MEDIADA POR PRXS, POR ULTIMO, UNA CARACTERISTICA NOTABLE DEL FENOTIPO DE LOS MUTANTES AFECTADOS EN LA HOMEOSTASIS REDOX DEL CLOROPLASTO ES SU ALTA MORTALIDAD EN FASE DE PLANTULA, POR ELLO OTRO OBJETIVO DE ESTE PROYECTO CONSISTE EN ESTUDIAR LA BASE MOLECULAR DE ESTA ALTERACION DEL DESARROLLO, PROPONEMOS ABORDAR ESTOS OBJETIVOS CON LA COMBINACION DE APROXIMACIONES GENETICAS, FISIOLOGICAS Y BIOQUIMICAS QUE HEMOS VENIDO UTILIZANDO PERO COMPLEMENTADAS CON APROXIMACIONES MASIVAS, PARA ELLO, EN EL SUBPROYECTO 1 SE PROPONE UN ANALISIS TRANSCRIPTOMICO BASADO EN RNA-SEQ, MIENTRAS QUE EN EL SUBPROYECTO 2 SE OPTIMIZARA LA METODOLOGIA DE PROTEOMICA REDOX EN PLANTAS Y SE APLICARA PARA ESTUDIAR EL EFECTO DEL SISTEMA NTRC/2-CYS PRXS SOBRE EL PROTEOMA REDOX DE LOS MUTANTES GENERADOS EN EL SUBPROYECTO 1, ARABIDOPSIS\CLOROPLASTO\TIORREDOXINAS\PEROXIRREDOXINAS\REGULACIÓN REDOX\FOTOSÍNTESIS\PROTEÓMICA REDOX