Descripción del proyecto
EL OBJETIVO DE ESTE PROYECTO ES LA CARACTERIZACION BIOQUIMICA, MOLECULAR Y FUNCIONAL EN PLANTAS DE GUISANTE (PISUM SATIVUM L,) DE DETERMINADOS SISTEMAS ANTIOXIDANTES DE REGULACION REDOX MITOCONDRIALES, CLOROPLASTIDICOS Y NUCLEARES, TAMBIEN SE ANALIZARA LA PARTICIPACION DE ESTOS ORGANULOS CELULARES EN EL MECANISMO DEL ESTRES OXIDATIVO INDUCIDO POR NACL Y POR ESPECIES REACTIVAS DEL NITROGENO, SE PROFUNDIZARA EN LA INTERACCION DE LA TIORREDOXINA MITOCONDRIAL PSTRXO1 QUE HEMOS CLONADO EN HOJAS DE GUISANTE, CON ALGUNAS DE SUS PROTEINAS DIANA MITOCONDRIALES COMO AOX Y MN-SOD, MEDIANTE BIFC Y MICROCALORIMETRIA, SE CORROBORARA LA PRESENCIA DE ESTA PSTRXO1 EN NUCLEO, PREVIAMENTE DETECTADA EN ESTE COMPARTIMENTO MEDIANTE INMUNOLOCALIZACION, PARA ELLO SE HARAN ENSAYOS DE WESTERN BLOT Y DE EXPRESION TRANSITORIA CON GFP Y TAMBIEN SE ANALIZARA EL EFECTO DEL ESTRES OXIDATIVO INDUCIDO POR NACL Y DEL ESTRES NITROSATIVO, SOBRE LA LOCALIZACION CELULAR, PARALELAMENTE SE REALIZARA UNA PROSPECCION DE SUS POSIBLES DIANAS NUCLEARES EMPLEANDO PSTRXO1 MUTADA EN UNA CISTEINA CON EL FIN DE DETERMINAR LOS PROCESOS NUCLEARES EN QUE SE ENCUENTRA INVOLUCRADA, TAMBIEN SE EFECTUARA LA CLONACION Y LA CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE LA SULFIRREDOXINA (SRX) CLOROPLASTIDICA DE GUISANTE Y A, THALIANA Y SE ESTUDIARA IN VIVO E IN VITRO SU INTERACCION CON LA 2-CYS-PRX , LA LOCALIZACION CELULAR DE ESTA SRX SE DETERMINARA POR ENSAYOS DE IMPORTACION A ORGANULOS E INMUNOLOCALIZACION, SE REALIZARAN ESTUDIOS DE LA RESPUESTA DE LOS SISTEMAS ANTIOXIDANTES MITOCONDRIALES, SISTEMA PSTRXO1/PRXIIF, QUE HEMOS CLONADO, MN-SOD, Y DE ALGUNOS COMPONENTES DE LA CADENA RESPIRATORIA (CI, CIV Y OXIDASA ALTERNATIVA), ASI COMO DE LA SRX Y 2-CYS-PRX CLOROPLASTIDICAS, A DISTINTOS GENERADORES DE NO,, AL PEROXINITRITO Y AL ESTRES POR NACL, PARA ELLO SE UTILIZARAN APROXIMACIONES PROTEOMICAS, CELULARES Y MOLECULARES, TANTO DE MITOCONDRIAS PURIFICADAS COMO DE TEJIDO FOLIAR DE PLANTAS TRATADAS CON LOS DISTINTOS AGENTES ESTRESANTES, ESTOS ESTUDIOS SE COMPLEMENTARAN CON EL ANALISIS DE PROTEINAS S-NITROSILADAS, FINALMENTE SE INICIARAN ESTUDIOS FUNCIONALES DE LA PSTRXO1 EN PLANTAS DE MEDICAGO Y ARABIDOPSIS ANALIZANDO LOS DISTINTOS FENOTIPOS Y LA POSIBLE COMPLEMENTACION TANTO EN CONDICIONES NORMALES COMO DE ESTRES (NACL Y NO,), antioxidantes\NaCl\estres oxidativo\estres nitrosativo\mitocondrias\cloroplastos\nucleo\señalización redox\tiorredoxina\peroxirredoxina\sulfirredoxina