Descripción del proyecto
LOS PROCESOS DE SEÑALIZACION A TRAVES DE RECEPTORES ACOPLADOS A PROTEINAS G ESTAN INVOLUCRADOS EN UNA GRAN VARIEDAD DE PROCESOS FISIOLOGICOS Y PATOLOGICOS. LOS OBJETIVOS DE NUESTRA INVESTIGACION SE CENTRAN EN EL ESTUDIO DE LOS MECANISMOS QUE REGULAN LA MIGRACION CELULAR Y LA INVASION A TRAVES DE PROTEINAS G Y GPCRS. VARIOS EFECTORES DE LAS PROTEINAS Gα12 HAN SIDO IDENTIFICADOS A LO LARGO DE LOS ULTIMOS AÑOS. ENTRE ELLOS LAS PROTEINAS RHOGTPASICAS, EN PARTICULAR, PARECEN SER UNO DE LOS EFECTORES ESENCIALES PARA ESTOS PROCESOS. SIN EMBARGO PARECE QUE OTROS EFECTORES DE LAS VIAS DE Gα12 PODRIAN SER TAMBIEN NECESARIOS. EN ESTA LINEA NUESTRO GRUPO HA DESCRITO UN NUEVO EFECTOR DE LAS PROTEINAS Gα12, LA CATENINA P120. LA UNION DE Gα12 A CATENINA REGULA EL ESTADO DE FOSFORILACION DE LA MISMA, PROCESO NECESARIO, A SU VEZ, PARA REGULAR LAS ADHESIONES CELULARES. ADEMAS PARECE QUE Gα12 PODRIA MODIFICAR LA CAPACIDAD INHIBITORIA DE RHO POR LA CATENINA P120. ASI LA UNION Y REGULACION DE P120CTN POR Gα12 PODRIA AYUDAR A ENTENDER ALGUNOS DE LOS EFECTOS POSTERIORES DE LAS VIAS DE SEÑALIZACION DE G12. EL OBJETIVO DE NUESTRO PROYECTO ES LOGRAR UNA COMPRENSION COMPLETA DE LA SEÑALIZACION POR G12 Y GPCRS IMPLICADOS EN MIGRACION LO QUE REQUERIRA LA ELUCIDACION DE LAS VIAS MOLECULARES Y DE LOS EFECTORES ESPECIFICOS. PARA ELLO, LOS OBJETIVOS DEL PROYECTO SE RESUMEN EN: 1) LA IDENTIFICACION DE VARIANTES MUTACIONALES DEL Gα12 COMO HERRAMIENTA VALIOSA PARA DESCIFRAR LAS VIAS DE G12; 2) ESTUDIAR LA DINAMICA TEMPORAL DE LAS PROTEINAS P120CTN Y Gα12 EN LA MIGRACION DE LAS CELULAS Y, A SU VEZ, DESARROLLAR BIOSENSORES DE PROTEINAS G; 3) ESTUDIAR LA IDENTIDAD DE LOS SITIOS DE FOSFORILACION INDIVIDUALES EN P120CTN, EL PAPEL DE LAS PROTEINAS ACCESORIAS COMO EL 14-3-3 Y SU MECANISMO (S) DE REGULACION POR Gα12; 4) INVESTIGAR LA NUEVA UBICACION DE LAS PROTEINAS EN Gα12 EN LA MEMBRANA INTERNA DE LA MITOCONDRIA Y SU POSIBLE PAPEL EN LA FISIOLOGIA CELULAR Y MIGRACION; 5) ESTUDIAR LA FUNCION DE FILAMINA A Y RHO EN LA SEÑALIZACION INDUIDA POR GPCRS. LA APLICACION DE LA TECNOLOGIAS DE SIRNA, LA DISPONIBILIDAD DE P120CTN, FLNA Y Gα12 CELULAS KNOCK-OUT, PROTEINAS FLUORESCENTES Y LA APLICACION DE TECNICAS DE IMAGENEN EN CELULAS IN VIVO Y A TIEMPO REAL FACILITARAN LA CARACTERIZACION DE LAS VIAS DE LA PROTEINA G EN LA MIGRACION CELULAR. ADEMAS LA UTILIZACION DE TECNICAS DE PROTEOMICA Y LA TECNOLOGIA SILAC EN MITOCONDRIAS PURIFICADAS AYUDARA A DESCUBRIR NUEVAS PROTEINAS QUE INTERACCIONEN CON LAS PROTEINAS G. ESTAS TECNOLOGIAS AYUDARAN A TENER UN PANORAMA COMPLETO DE LOS EFECTORES Y LOS EFECTOS DE LA PROTEINA G EN SEÑALIZACION Y MIGRACION CELULAR. ROTEINAS G\MITOCONDRIAS\CATENINAS\MIGRACION\SEÑALIZACION\GPCRS