Descripción del proyecto
CONJUGACION DE PLASMIDOS, EL PROCESO MEDIANTE UN PLASMIDO SE TRANSFIERE DE UNA CELULA HACIA OTRA, CONTRIBUYE DE MANERA SIGNIFICATIVA A LA TRANSFERENCIA GENICA HORIZONTAL. MUCHOS PLASMIDOS CONJUGATIVOS CONLLEVAN GENES DE RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS (RA), Y CONJUGACION ES LA RUTA PRINCIPAL PARA LA DISEMINACION DE LOS GENES DE RA. HASTA AHORA, LA MAYORIA DE ESTUDIOS DE CONJUGACION SE HAN REALIZADO BASADOS EN ELEMENTOS DE CONJUGACION CON ORIGEN GRAM-NEGATIVO (G-). EL MICROBIOMA INTESTINAL ES UN NICHO ESPECIALMENTE APTO PARA LA APARICION Y DISEMINACION DE LA RA. BACTERIAS GRAM-POSITIVAS (G+) CONSTITUYEN UNA GRAN PARTE DE LA MICROBIOMA INTESTINAL, EN PARTICULAR LAS BACTERIAS G+ PERTENECIENTES AL FILO FIRMICUTES. SON ESPECIALMENTE ELEVADAS LAS BACTERIAS INTESTINALES DEL FILO FIRMICUTES QUE SE HAN CONVERTIDO DE SER RESISTENTES A ANTIBIOTICOS. LA OMS HA MARCADO ESTE COMO UNA SITUACION MUY PREOCUPANTE. POR LO TANTO, UNA MEJOR COMPRENSION DEL PROCESO DE LA CONJUGACION DE ELEMENTOS DE CONJUGACION DE BACTERIAS G+, Y EN PARTICULAR LOS DE FIRMICUTES, ES NECESARIO PARA DISEÑAR ESTRATEGIAS QUE PUEDEN INTERFERIR CON LA DISEMINACION DE RA MEDIADO POR CONJUGACION. POR OTRO LADO, LOS SISTEMAS DE CONJUGACION PRESENTES EN PLASMIDOS NATIVOS PUEDEN SER EXPLOTADOS PARA DISEÑAR HERRAMIENTAS PARA MODIFICAR GENETICAMENTE BACTERIAS QUE SON RELEVANTES EN LA INDUSTRIA Y ENTORNOS CLINICOS PERO QUE SON REACIOS A MODIFICACION GENICA POR OTROS METODOS. BACILLUS SUBTILIS NATTO, - UN BACTERIUM DEL FILO FIRMICUTES, SE UTILIZA PARA LA FERMENTACION DE LA SOJA PARA PREPARAR EL PLATO "NATTO". VARIAS CEPAS DE B. SUBTILIS NATTO CONTIENEN UN PLASMIDO CONJUGATIVO. B. SUBTILIS ESPECIES QUE ALBERGAN PLASMIDOS DE CONJUGACION FORMAN PARTE DE LA MICROBIOTA INTESTINAL DE ANIMALES Y SERES HUMANOS, Y ES PROBABLE QUE DESEMPEÑEN UN PAPEL EN LA DISEMINACION DE GENES AR. ADEMAS, VARIOS BACILOS TIENEN IMPORTANTES APLICACIONES INDUSTRIALES, MIENTRAS QUE OTROS SON PATOGENOS (OPORTUNISTAS). ESTAS SON LAS RAZONES PRINCIPALES POR LA QUE HEMOS ESTADO ESTUDIANDO EL PLASMIDO CONJUGATIVO PLS20 DE B. SUBTILIS NATTO, ASI COMO UN PLASMIDO RELACIONADO, P576, DE BACILLUS PUMILUS.LOS PRINCIPALES OBJETIVOS DE ESTE SUBPROYECTO CONCIERNEN ESTUDIAR LA ARQUITECTURA DE PROTEINAS QUE JUEGAN UN PAPEL CRUCIAL EN DIFERENTES ETAPAS DEL PROCESO DE CONJUGACION. LOS AVANCES QUE PUEDEN DAR LA EJECUCION DE ESTE PROYECTO DARAN INFORMACION VALIOSA SOBRE EL MECANISMO DE ACCION DE ESTAS PROTEINAS. EL IP TIENE UNA EXPERIENCIA EXTENSA EN ESTE CAMPO Y UNA TRAYECTORIA DOCUMENTADA DE PUBLICACIONES DE CALIDAD EN TEMAS MUY RELACIONADOS. LAS ETAPAS ESCOGIDAS EN ESTE ESTUDIO SON (A) SELECCION DE CELULA RECEPTORA, (B) ACTIVACION/REGULACION DE (GENES DE) LA CONJUGACION, (C) PROCESAMIENTO DE ADN PLASMIDICO, Y (D) EL ESTABLECIMIENTO DEL PLASMIDO TRANSFERIDO EN LA CELULA RECEPTORA. UN PUNTO IMPORTANTE DE ESTE SUBPROYECTO ES QUE LOS RESULTADOS PUEDEN ABRIR VIAS PARA DESARROLLAR FARMACOS/METODOS PARA INTERFERIR CON LA DISEMINACION DE RA MEDIADO POR CONJUGACION.PARA ALGUNAS DE LAS PROTEINAS QUE PROPONEMOS ESTUDIAR, YA TENEMOS CRISTALES INICIALES. PARA LA MAYORIA, YA CONSEGUIMOS PRODUCIRLAS CON UNA PUREZA APTA PARA INICIAR PRUEBAS DE CRISTALIZACION. POR LO TANTO, ESTAMOS CONVENCIDOS DE QUE LA EJECUCION DE ESTE PROYECTO DARA LUGAR A IMPORTANTES AVANCES DE LA COMPRENSION DE LAS DIVERSAS FACETAS DE LA CONJUGACION QUE PUEDE SERVIR PARA DISEÑAR ESTRATEGIAS PARA INTERFERIR CON LA CONJUGACION. ESISTENCIA A ANTIBIOTICOS\ANALISIS ESTRUCTURAL DE PROTEÍNAS\TRANSCRIPCIÓN\PLÁSMIDO\BACILLUS\GRAM POSITIVO\TRANSFERENCIA GÉNICA HORIZONTAL\CONJUGACIÓN