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BIO2014-55462-R

Financiado

PAPEL DE LAS DNA TOPOISOMERASAS Y DE LAS PROTEINAS DE UNION AL NUCLEOIDE EN LA O...

PAPEL DE LAS DNA TOPOISOMERASAS Y DE LAS PROTEINAS DE UNION AL NUCLEOIDE EN LA ORGANIZACION DEL CROMOSOMA DE STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE: RESPUESTA A ANTIBIOTICOS Y VIRULENCIA LAS DNA TOPOISOMERASAS Y LAS PANS (PROTEINAS ASOCIADAS AL NUCLEOIDE) SON RESPONSABLES DE LA ORGANIZACION TOPOLOGICA DEL CROMOSOMA BACTERIANO, LAS PRIMERAS SON DIANAS DE LAS FLUOROQUINOLONAS (FQS), TALES COMO LEVOFLOXACINA (LVX) Y... ver más

01/01/2014

ISCIII

194K€

Presupuesto del proyecto: 194K€

Líder del proyecto

INSTITUTO DE SALUD CARLOS III (ISCIII) No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 4-5 | 23M€

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2014-01-01

0% 100%

Participantes

ISCIII

Lider

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Líder del proyecto

INSTITUTO DE SALUD CARLOS III (ISCIII)

TRL 4-5 | 23M€

Presupuesto del proyecto 194K€

Descripción del proyecto LAS DNA TOPOISOMERASAS Y LAS PANS (PROTEINAS ASOCIADAS AL NUCLEOIDE) SON RESPONSABLES DE LA ORGANIZACION TOPOLOGICA DEL CROMOSOMA BACTERIANO, LAS PRIMERAS SON DIANAS DE LAS FLUOROQUINOLONAS (FQS), TALES COMO LEVOFLOXACINA (LVX) Y MOXIFLOXACINA (MOX), UTILIZADAS EN CLINICA, Y DE LA SECONEOLITSINA (SCN), NUEVO ANTIBIOTICO FRENTE A LA TOPOISOMERASA I DESCUBIERTO EN NUESTRO LABORATORIO, LAS PANS SON POTENCIALES REGULADORAS DE LA VIRULENCIA Y DE LA RESPUESTA A ANTIMICROBIANOS, PARA CONOCER LA CONSERVACION DE LA ORGANIZACION DEL GENOMA DE S, PNEUMONIAE EN DOMINIOS TOPOLOGICOS, SE REALIZARA INICIALMENTE UN ESTUDIO BIOINFORMATICO DE LAS SECUENCIAS GENOMICAS DE CEPAS YA ANOTADAS, ASIMISMO, SE SECUENCIARAN GENOMAS DE AISLADOS RESISTENTES A FQS DE ESPECIAL RELEVANCIA: 4 AISLADOS CON EVOLUCION DE RESISTENCIA A FQS EN UN PACIENTE; 2 AISLADOS CON MECANISMO DE EFLUJO DE FQS Y 5 AISLADOS CON TOPOISOMERASAS RECOMBINANTES,REALIZAREMOS UN ESTUDIO BIOQUIMICO PARA IDENTIFICAR LAS PANS DE S, PNEUMONIAE, SE AISLARAN NUCLEOIDES, SE EXTRAERAN LAS PROTEINAS ASOCIADAS Y SE IDENTIFICARAN POR ESPECTROMETRIA DE MASAS, TAMBIEN SE ESTUDIARA EL PAPEL DE LAS PROTEINAS SPR0929 Y SPR1010, POSIBLES PANS, SE ANALIZARAN EL CRECIMIENTO Y LA VIABILIDAD DE CEPAS CON DELECIONES EN LOS GENES QUE LAS CODIFICAN UTILIZANDO ANTIBIOTICOS QUE INHIBEN LAS DIFERENTES TOPOISOMERASAS: TOPO IV (LVX); GIRASA (MOX; NOV); TOPO I (SCN), SE ESTIMARA EL NIVEL DE SUPERENROLLAMIENTO MEDIANTE EL ANALISIS DE TOPOISOMEROS DE UN PLASMIDO INTERNO EN ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL, SE PURIFICARAN LAS PROTEINAS, SE CARACTERIZARA SU UNION A DNA Y SE TESTARA SU EFECTO EN LA ACTIVIDAD DE CADA TOPOISOMERASA, SE ESTUDIARA SU PAPEL EN VIRULENCIA EN UN MODELO MURINO DE SEPSIS, PARA VISUALIZAR LA OCUPACION PROTEICA DEL CROMOSOMA, SE MAPEARAN LOS SITIOS DE UNION DE PANS IN VIVO, SE UTILIZARA LA CEPA SILVESTRE R6 Y SU DERIVADO ISOGENICO R6DF1-6, QUE CARECE DE LOS 6 DOMINIOS F (5,48% DEL GENOMA), POSIBLES REGIONES DE UNION DE PANS, SE FIJARAN LAS INTERACCIONES DNA-PROTEINA CON FORMALDEHIDO, SE LISARAN LAS CELULAS Y SE EXTRAERAN LOS COMPLEJOS DE LA INTERFASE ACUOSA/FENOLICA, SE AISLARAN LOS FRAGMENTOS DE DNA Y SE SECUENCIARAN, COMO CONTROL, SE ANALIZARAN LAS UNIONES DE LA PROTEINA HU (UNA PAN IMPORTANTE PARA LA COMPACTACION DEL CROMOSOMA) Y DE RPOB (SUBUNIDAD BETA DE LA RNA POLIMERASA), TRAS TRATAR LAS CEPAS R6 Y R6DF1-6 CON FORMALDEHIDO SE INMUNOPRECIPITARAN LOS COMPLEJOS CON ANTICUERPOS ANTI-HU O ANTI-RPOB UNIDOS A PARTICULAS MAGNETICAS, LO QUE PERMITIRA AISLAR LOS COMPLEJOS DE LOS QUE SE AISLARA EL DNA QUE SERA SECUENCIADO, PARA ESTUDIAR EL PAPEL DE LOS DOMINIOS F, SE ESTUDIARAN EL CRECIMIENTO Y NIVEL DE SUPERENROLLAMIENTO EN PRESENCIA DE ANTIBIOTICOS QUE INHIBEN LAS TOPOISOMERASAS DE CEPAS QUE LLEVAN DIVERSAS DELECIONES DE ESTOS DOMINIOS, SE HARA UN ANALISIS TRANSCRIPTOMICO EN PRESENCIA DE DICHOS INHIBIDORES MEDIANTE QRT-PCR Y MICROARRAYS,TAMBIEN SE CARACTERIZARA LA TRANSCRIPCION GLOBAL EN PRESENCIA DE MOX Y SCN, ADEMAS, SE DETERMINARA EL MAXIMO NIVEL DE SUPERENROLLAMIENTO QUE ADMITE EL CROMOSOMA ANALIZANDO LA VIABILIDAD CELULAR EN UN RANGO DE VALORES EN PRESENCIA DE SCN, ASIMISMO, SE DETERMINARA EL PAPEL DE LAS ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO EN LA LETALIDAD DE SCN Y MOX Y EL EFECTO POSTANTIBIOTICO DE LA SCN,ADEMAS SE ESTUDIARAN LAS ISLAS CROMOSOMICAS INDUCIDAS POR FAGOS QUE PODRIAN ESTAR IMPLICADAS EN VIRULENCIA Y, DADO QUE SE INDUCEN CON FQS, PODRIAN TENER UN PAPEL EN EL DESARROLLO DE LA RESISTENCIA, DOMINIOS TOPOLÓGICOS\DNA TOPOISOMERASAS\PROTEÍNAS ASOCIADAS AL NUCLEOIDE\FLUOROQUINOLONAS\SECONEOLITSINA\REGULACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN POR SUPER\ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO

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