Descripción del proyecto
LOS PECES TIENEN UN SISTEMA INMUNE INNATO (NO ESPECIFICO) Y ADQUIRIDO (ESPECIFICO). AMBAS RESPUESTAS CONSTITUYEN UN SISTEMA COMBINADO. ASI, LA RESPUESTA INNATA GENERALMENTE PRECEDE A LA ADAPTATIVA ACTIVANDOLA Y DETERMINANDO SU NATURALEZA. LA RESPUESTA INNATA PUEDE SER POTENCIADA UTILIZANDO ADYUVANTES QUE SON IMPORTANTES PARA AUMENTAR LA EFICACIA DE LAS VACUNAS. EN ESTE SUBPROYECTO NOS CENTRAREMOS EN TRES OBJETIVOS PRINCIPALES 1) ESTUDIO DEL EFECTO DE ADYUVANTES Y PAPEL DE LA RESPUESTA INNATA EN LA PROTECCION DE VACUNAS DE DNA PARA VHSV, USANDO EL PEZ CEBRA (DANIO RERIO) COMO MODELO; 2) TRANSFERENCIA DEL CONOCIMIENTO ADQUIRIDO EN EL OBJETIVO 1 PARA DESARROLLAR UNA VACUNA DE DNA PARA VHSV EN RODABALLO (PSETTA MAXIMA) Y 3) EVALUAR LA PROTECCION CONFERIDA POR EL PROTOTIPO DE VACUNA DE VHSV DESARROLLADA EN EL OBJETIVO 2, DEPENDIENDO DE LA RUTA DE ADMINISTRACION. OBJETIVO 1: EL PEZ CEBRA ES UN BUEN MODELO PARA ANALISIS GENETICOS DEBIDO A SU CICLO DE VIDA CORTO, PUESTAS RELATIVAMENTE GRANDES A LO LARGO DEL AÑO, FACIL CULTIVO Y DESARROLLO EXTERNO CON EMBRIONES TRANSPARENTES. ADEMAS, EN EL PEZ CEBRA EXISTE UNA CLARA SEPARACION TEMPORAL ENTRE LOS SISTEMAS INMUNES INNATO Y ADAPTATIVO, LO QUE PERMITE EL ESTUDIO INDEPENDIENTE DE AMBAS RESPUESTAS. EN ESTE SUBPROYECTO ESTUDIAREMOS LOS PERFILES DE EXPRESION DE LA RESPUESTA TEMPRANA EN PEZ CEBRA USANDO MICROARRAYS DESPUES DE LA VACUNACION (CON Y SIN ADYUVANTES GENERADOS EN ESTE Y OTROS SUBPROYECTOS DENTRO DE LA PROPUESTA), PARA SELECCIONAR GENES CANDIDATOS POTENCIALMENTE RELACIONADOS CON LA RESISTENCIA AL VHSV. EL BLOQUEO Y/O SOBRE EXPRESION DE ESTOS GENES CANDIDATOS PERMITIRA CONOCER SU FUNCION Y POR TANTO SU USO POTENCIAL COMO ADYUVANTES. ADEMAS, SE UTILIZARA UN PEZ CEBRA MUTANTE (RAG1-/-) SIN SISTEMA INMUNE ADAPTATIVO FUNCIONAL, PARA COMPARAR LA RESPUESTA INNATA FRENTE A INDIVIDUOS SALVAJES, YA QUE SE HIPOTETIZA QUE ESTOS MUTANTES TIENEN POTENCIADA SU RESPUESTA INNATA, PARA COMPENSAR LA AUSENCIA DE ADAPTATIVA.OBJETIVO 2: AUNQUE SE HA ALCANZADO UN CONSIDERABLE PROGRESO EN EL CAMPO DE LAS VACUNAS DE DNA, SU ACEPTACION FORMAL DEPENDE DE SU SEGURIDAD Y EFICACIA EN VACUNACIONES DE CAMPO. LA VACUNA DE DNA PARA VHSV FUNCIONA ADECUADAMENTE Y PRESENTA UN PERFIL DE SEGURIDAD EXCELENTE, PERO LOS DISEÑOS INICIALES NO PRESENTAN SUFICIENTE INMUNOGENICIDAD EN ESPECIES DE PECES DIFERENTES DE SALMONIDOS. SIN EMBARGO, SE HA AISLADO UNA CEPA DEL VHSV DEL AMBIENTE MARINO QUE PROVOCA ENFERMEDAD EN ESPECIES CULTIVADAS, PRINCIPALMENTE EN RODABALLO, CON BROTES DESCRITOS EN VARIOS PAISES (LOPEZ-VAZQUEZ ET AL., 2007). COMO NO SE HA DESARROLLADO UNA VACUNA DE DNA FRENTE A VHSV HASTA LA FECHA Y TENIENDO EN CUENTA EL CONOCIMIENTO GENERADO EN EL PROYECTO COORDINADO, ESTE SUBPROYECTO INTENTARA DESARROLLAR UNA VACUNA DE DNA FRENTE AL VHSV DE RODABALLO. EL GEN GPG DEL VHSV CLONADO EN LOS PLASMIDOS SELECCIONADOS SE UTILIZARA EN ENSAYOS DE INMUNIZACION DE RODABALLO POR INYECCION INTRAMUSCULAR, EN LA AUSENCIA O PRESENCIA DE ADYUVANTES MOLECULARES. SE LLEVARA A CABO UNA EVALUACION DE LA PROTECCION CONFERIDA POR LA VACUNA, PARA SELECCIONAR LA MEJOR CANDIDATA (COMBINACION DE VECTOR-GEN/ADYUVANTE).OBJETIVO 3: FINALMENTE, SE LLEVARAN A CABO ENSAYOS DE VACUNACION EN MASA DE LOS PROTOTIPOS DE VACUNAS OPTIMIZADAS Y AQUELLAS NANOPARTICULAS GENERADAS EN OTRAS TAREAS DE OTROS SUBPROYECTOS, QUE PRESENTEN LOS MEJORES RESULTADOS DESPUES DE LA INMUNIZACION POR INMERSION. HSV\ADYUVANTES\RESPUESTAS INNATAS\VACUNAS DE DNA\RODABALLO\PEZ CEBRA\TRUCHA