Descripción del proyecto
LOS SISTEMAS DE RESCATE AL AYUNO DE FOSFATO (PI), SOBRE TODO LOS DE LAS BACTERIAS Y LEVADURAS, SON MODELOS EMBLEMATICOS PARA ESTUDIOS DE REGULACION DE LA ACTIVIDAD GENICA DESDE EL COMIENZO DE LA GENETICA MOLECULAR, ESTE SISTEMA EN PLANTAS ESTA GANANDO INTERES ADICIONAL DEBIDO A SU MAYOR COMPLEJIDAD Y SOFISTICACION, Y ESPECIALMENTE DEBIDO A SU POTENCIAL PARA MEJORAR LA ADQUISICION Y USO DE PI EN LOS CULTIVOS, UN OBJETIVO FUNDAMENTAL EN EL CONTEXTO DE LA AGRICULTURA SOSTENIBLE, DESDE COMIENZOS DEL 2000, SE HA AVANZADO MUCHO EN EL CONOCIMIENTO SOBRE LOS COMPONENTES DE LA RUTA DE SEÑALIZACION DE AYUNO DE PI EN PLANTAS, ESPECIALMENTE RELEVANTE EN RELACION A ESTA PROPUESTA, HA SIDO LA IDENTIFICACION DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION (TF) PHR1 COMO REGULADOR MAESTRO DE LAS RESPUESTAS AL AYUNO DE PI (PSR) Y EL RECIENTE DESCUBRIMIENTO DE LA PARTICIPACION DE SPX1 EL MECANISMO SENSOR DE PI, PHR1 PERTENECE A LA SUPERFAMILIA DE MYB Y JUNTO CON SU HOMOLOGO PHL1, CONTROLA >65% DE TODA LA RESPUESTA TRANSCRIPCIONAL AL AYUNO DE PI, MEDIANTE CHIP-SEQ HEMOS COMPROBADO QUE ALREDEDOR DEL 20% DE LOS GENES QUE RESPONDEN AL AYUNO DE PI SON DIANAS DIRECTAS DE PHR1, ESTOS GENES DIANA SON RECONOCIDOS POR PHR1 A TRAVES DE DOS MOTIVOS DISTINTOS P1BSI Y P1BSII, QUE PHR1 LOS UNE EN FORMA DE DIMERO Y MONOMERO, RESPECTIVAMENTE, AUN NO SE HA ESTABLECIDO DE MANERA CONCLUYENTE SI ESTOS SITIOS DE UNION COMPARTEN LA MISMA LOGICA CIS-REGULADORA O SI CADA MOTIVO TIENE DIFERENTES PROPIEDADES COMBINATORIAS, SPX1 ES UNA PROTEINA NUCLEAR QUE CONTIENE UN DOMINIO SPX PRESENTE EN SENSORES PI DE LEVADURA; NOSOTROS HEMOS MOSTRADO QUE SPX1 INTERACCIONA CON PHR1 IN PLANTA DE UNA MANERA DEPENDIENTE PI, EN ENSAYOS IN VITRO CON PROTEINAS PURIFICADAS HEMOS COMPROBADO QUE SPX1 ES UN INHIBIDOR DEPENDIENTE DE PI DE LA UNION DE PHR1 AL DNA, EL HECHO DE QUE LA FUNCION DE SPX1 DEPENDA DIRECTAMENTE DE PI INDICA SU PAPEL EN MECANISMO SENSOR DE ESTE, SE DESCONOCE LA BASE ESTRUCTURAL DEL EFECTO DE PI EN LA INTERACCION SPX1: PHR1, Y SI LA FUNCION SPX1 SE EXTIENDE MAS ALLA DE SU EFECTO SOBRE PHR1, AUNQUE ALGUNOS DATOS SUGIEREN QUE SPX1 INTERACTUA CON REGULADORES ADICIONALES ESTE PROYECTO GRAVITA EN TORNO A SPX1 Y PHR1, CON EL OBJETIVO DE COMPRENDER EL MECANISMO SENSOR DE PI Y LA LOGICA DE REGULACION CIS-TRANS EN EL CONTROL DE LAS PSRS, Y EVALUAR EL POTENCIAL APLICADO DE LOS CONOCIMIENTOS GENERADOS, EN CONCRETO, SE PROPONEN LOS SIGUIENTES OBJETIVOS ESPECIFICOS: 1) EL SENSOR DE PI 1,1) BUSQUEDA DE INTERACTORES EN VIVO DE SPX1 USANDO Y2H Y CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD TAP TAGGING1,2) DETERMINACION DE LA ESTRUCTURA DE SPX1 SOLO Y EN COMBINACION CON PHR1, EN PRESENCIA Y AUSENCIA DE PI 2) LOGICA REGULADORA CIS-TRANS EN EL CONTROL DE LAS PSR 2,1) IDENTIFICACION DE MOTIVOS CIS ASOCIADOS A PSR, UTILIZANDO ATAC-SEQ 2,2) BUSQUEDA BIOINFORMATICA DE TFS CORRESPONDIENTES A LOS MOTIVOS CIS-IDENTIFICADOS Y SU VALIDACION EXPERIMENTAL 2,3) EXPLORACION DEL POTENCIAL COMBINATORIO TOTAL DE LOS MOTIVOS CIS P1BSI Y P1BSII, 3) POTENCIAL APLICADO 3,1) ESTUDIO DEL EFECTO EN PLANTAS DE ARABIDOPSIS CRECIDAS BAJO DIFERENTES REGIMENES DE ALTERAR LA ACTIVIDAD DE FACTORES TRANSCRIPCIONALES , Y DE LA ALTERACION DE LOS PARAMETROS CINETICOS DE LA ACTIVIDAD SPX1 3,2) ESTUDIO DEL EFECTO DE LA ALTERACION DE LA ACTIVIDAD DE DOS TFS REGULADORES DE PSR EN EL PLANTAS DE ARROZ CRECIDAS EN SUELOS POBRES EN PI ARABIDOPSIS\SENSOR DE FOSFATO\LOGICA REGULADORA COMBINATORIAL\AGRICULTURA SOSTENIBLE