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SAF2010-20961

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ESTUDIOS SOBRE LA EXPRESION DE RNAS PROCESADOS MEDIANTE SPLICING DE VIH-1 IN VIV...

ESTUDIOS SOBRE LA EXPRESION DE RNAS PROCESADOS MEDIANTE SPLICING DE VIH-1 IN VIVO TODOS LOS RNAS DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 (VIH-1) SE EXPRESAN A PARTIR DE UN UNICO TRANSCRITO PRIMARIO QUE ES PROCESADO MEDIANTE UN COMPLEJO MECANISMO DE SPLICING ALTERNATIVO, QUE PERMITE GENERAR MAS DE 40 RNA... ver más

01/01/2010

ISCIII

121K€

Presupuesto del proyecto: 121K€

Líder del proyecto

INSTITUTO DE SALUD CARLOS III (ISCIII) No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 4-5 | 23M€

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2010-01-01 No tenemos la información de la convocatoria

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ISCIII

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Líder del proyecto

INSTITUTO DE SALUD CARLOS III (ISCIII) No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 4-5 | 23M€

Presupuesto del proyecto 121K€

Descripción del proyecto TODOS LOS RNAS DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 (VIH-1) SE EXPRESAN A PARTIR DE UN UNICO TRANSCRITO PRIMARIO QUE ES PROCESADO MEDIANTE UN COMPLEJO MECANISMO DE SPLICING ALTERNATIVO, QUE PERMITE GENERAR MAS DE 40 RNAS DIFERENTES, LA GRAN MAYORIA DE LOS ESTUDIOS SOBRE EL SPLICING DEL VIH-1 SE HAN HECHO EN ENSAYOS IN VITRO, SOLO SE HA PUBLICADO UN ESTUDIO EN EL QUE SE ANALIZA SISTEMATICAMENTE LA EXPRESION DE TRANSCRITOS INDIVIDUALES DE VIH-1 EN CELULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERIFERICA (CMSP) DE PACIENTES INFECTADOS POR VIH-1, IDENTIFICANDOSE LOS RNAS POR EL TAMAÑO DE LOS PRODUCTOS DE PCR EN ELECTROFORESIS EN GEL DESNATURALIZANTE, RECIENTEMENTE HEMOS EXAMINADO LA EXPRESION DE TRANSCRITOS DE VIH-1 PROCESADOS MEDIANTE SPLICING EN CMSP DE 29 PACIENTES INFECTADOS POR VIH-1 MEDIANTE SECUENCIACION DE LOS PRODUCTOS AMPLIFICADOS, IDENTIFICAMOS 9 NUEVOS TRANSCRITOS DE VIH-1, ENTRE ELLOS DIVERSOS RNAS QUE CODIFICAN PARA UN PEPTIDO DE 34 AMINOACIDOS EN EL CARBOXI-TERMINO DE NEF (DESIGNADO C-NEF-34) Y UN RNA QUE CONTIENE UN EXON TRANSCRITO EN ORIENTACION ANTISENTIDO (CARRERA ET AL, AIDS RES HUM RETROVIRUSES, EN PRENSA), EL OBJETIVO PRINCIPAL DEL PRESENTE PROYECTO ES ANALIZAR LOS PATRONES DE EXPRESION DE LOS RNAS ALTERNATIVAMENTE PROCESADOS DEL VIH-1 EN DIFERENTES TIPOS CELULARES DE CMSP EN PACIENTES EN DIFERENTES ESTADIOS DE LA INFECCION, CORRELACIONANDOLOS CON LA EVOLUCION CLINICA, PARA ELLO SE ANALIZARAN 40 PACIENTES INFECTADOS POR VIH-1, 10 CON INFECCION RECIENTE (<6 MESES DESDE SEROCONVERSION), 10 CON INFECCION CRONICA ASINTOMATICA, 10 CON SIDA Y 10 NO PROGRESORES A LARGO PLAZO, SE IDENTIFICARAN Y CUANTIFICARAN LOS RNAS PROCESADOS DE VIH-1 EN LINFOCITOS CD4+ NAIVE Y ACTIVADOS, CD8+ Y CD4-/CD8-, ASI COMO EN MONOCITOS (CD14+), LOS RNAS SE AMPLIFICARAN MEDIANTE RT-PCR A PARTIR DE MRNA EXTRAIDO DE LAS CELULAS, UTILIZANDO UN CEBADOR FLUORESCENTE, REALIZANDO LA IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DE LOS PRODUCTOS MEDIANTE ELECTROFORESIS EN UN SECUENCIADOR AUTOMATICO UTILIZANDO EL PROGRAMA GENEMAPPER, TAMBIEN SE ANALIZARAN LOS PRODUCTOS DE PCR MEDIANTE CLONAJE Y SECUENCIACION, COMO CONTROLES DE AMPLIFICACION SE UTILIZARAN TRANSCRITOS SINTETIZADO IN VITRO A PARTIR DE CDNAS PROCEDENTES DE RNAS PROCESADOS DE VIH-1 CLONADOS PREVIAMENTE, SE EXAMINARA LA PRESENCIA DE RNAS TRANSCRITOS EN DIRECCION ANTISENTIDO UTILIZANDO CEBADORES ESPECIFICOS PARA LOS MISMOS, EN PACIENTES NO PROGRESORES A LARGO PLAZO SE ANALIZARAN EN EL GENOMA DEL VIH-1 LAS SECUENCIAS DE LOS SITIOS DE SPLICING Y DE ELEMENTOS REGULADORES DE SPLCING CON EL FIN DE IDENTIFICAR MUTACIONES ASOCIADAS A NO PROGRESION, UNA SEGUNDA PARTE DEL PROYECTO CONSISTE EN ANALIZAR LA SIGNIFICACION BIOLOGICA DEL TRANSCRITO QUE CODIFICA PARA EL PEPTIDO C-NEF-34, RECIENTEMENTE IDENTIFICADO POR NOSOTROS IN VIVO, PARA ELLO SE TRANSFECTARA UN PLASMIDO EN EL QUE SE HA CLONADO EL CDNA QUE CODIFICA PARA DICHO PEPTIDO EN CELULAS 293T Y SE ANALIZARA SU EXPRESION MEDIANTE WESTERN BLOT, TAMBIEN SE EXAMINARA SU EXPRESION EN CMSP INFECTADAS IN VITRO, SE INTRODUCIRA UNA MUTACION EN EL CODON DE INICIACION DEL C-NEF-34 Y SE ANALIZARA SU EFECTO EN LA CINETICA DE REPLICACION VIRAL EN INFECCION AGUDA DE LINFOCITOS CD4+ IN VITRO, TANTO EN CELULAS PREESTIMULADAS, COMO EN ESTIMULACION RETARDADA,

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