Descripción del proyecto
SALMONELLA ENTERICA ES UNA ESPECIE DE BACTERIAS PATOGENAS QUE PUEDEN PRODUCIR GASTROENTERITIS O ENFERMEDADES SISTEMICAS EN HUMANOS Y UNA GRAN VARIEDAD DE ANIMALES, SE TRATA DE BACTERIAS INTRACELULARES FACULTATIVAS QUE PUEDEN INFECTAR CELULAS FAGOCITICAS Y NO FAGOCITICAS IN VIVO, SALMONELLA POSEE DOS SISTEMAS DE SECRECION TIPO III (T3SS) RELACIONADOS CON LA VIRULENCIA, QUE SON ELEMENTOS FUNDAMENTALES EN SU INTERACCION CON LAS CELULAS HOSPEDADORAS, ESTOS SISTEMAS SON AUTENTICAS "JERINGUILLAS MOLECULARES" CAPACES DE SECRETAR Y TRANSLOCAR PROTEINAS BACTERIANAS, LLAMADAS EFECTORES, HACIA EL CITOPLASMA DE LAS CELULAS EUCARIOTICAS, LOS EFECTORES INTERFIEREN CON VIAS DE TRANSDUCCION DE SEÑALES EN EL HOSPEDADOR Y POSIBILITAN LA INTERNALIZACION DE LA BACTERIA Y SU SUPERVIVENCIA Y PROLIFERACION INTRACELULARES EN EL INTERIOR DE VACUOLAS, EL PROPOSITO GENERAL DE ESTE PROYECTO ES CONTRIBUIR A UN MEJOR CONOCIMIENTO DE LOS MECANISMOS DE VIRULENCIA DE SALMONELLA A TRAVES DEL ESTUDIO FUNCIONAL Y ESTRUCTURAL DE TRES EFECTORES DE T3SS CONCRETOS, SLRP, STEA Y SSEK1, Y DE SU EFECTO SOBRE LA CELULAS HOSPEDADORAS EUCARIOTICAS, NUESTRO GRUPO COMENZO A ESTUDIAR SLRP COMO PARTE DEL PROYECTO ANTERIOR, STEA Y SSEK1 SON EFECTORES DE T3SS IDENTIFICADOS RECIENTEMENTE CUYA FUNCION ES DESCONOCIDA, EN ESTE PROYECTO SE USARAN DIVERSOS MODELOS IN VITRO E IN VIVO, JUNTO A UNA COMBINACION DE METODOS GENETICOS, MICROBIOLOGICOS, BIOQUIMICOS, TRANSCRIPTOMICOS, PROTEOMICOS, DE BIOLOGIA CELULAR Y DE BIOLOGIA ESTRUCTURAL, LOS OBJETIVOS ESPECIFICOS SON:1, ANALIZAR LOS FACTORES AMBIENTALES Y GENETICOS QUE REGULAN LA EXPRESION DE LOS GENES SLRP, STEA Y SSEK1 DE SALMONELLA ENTERICA SEROVAR TYPHIMURIUM, SE ESTUDIARA LA EXPRESION EN DIFERENTES MEDIOS, CONDICIONES DE CULTIVOS Y FONDOS GENETICOS, A NIVEL TRANSCRIPCIONAL Y A NIVEL DE PROTEINAS, SE LLEVARAN A CABO ESCRUTINIOS PARA DETECTAR NUEVOS GENES REGULADORES DE LA EXPRESION DE SLRP, STEA Y SSEK1, 2, ESTUDIAR EL EFECTO DE SLRP, STEA Y SSEK1 EN EL HOSPEDADOR, SE COMPARARAN LA ESTIRPE SILVESTRE Y LAS MUTANTES CARENTES DE UNO U OTRO EFECTOR USANDO DISTINTOS MODELOS DE INFECCION: CULTIVOS CELULARES, RATONES Y EL MODELO NO MAMIFERO DE CAENORHABDITIS ELEGANS, EL EFECTO DE LA EXPRESION DE EFECTORES AISLADOS SE ENSAYARA EN CELULAS DE MAMIFERO Y EN LEVADURAS,3, ENCONTRAR PROTEINAS DEL HOSPEDADOR QUE SEAN DIANAS DE LOS EFECTORES STEA Y SSEK1, SE REALIZARAN ESCRUTINIOS POR EL SISTEMA DE DOBLE HIBRIDO EN LEVADURAS, LAS INTERACCIONES DETECTADAS SE CONFIRMARAN POR METODOS INDEPENDIENTES: CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD Y COINMUNOPRECIPITACION,4, DETERMINAR LA ESTRUCTURA DE LOS EFECTORES SLRP, STEA Y SSEK1, AISLADOS Y EN INTERACCION CON PROTEINAS DEL HOSPEDADOR,