Descripción del proyecto
EL CONTROL DE LA PROPORCION DE SEXOS EN ANIMALES DE LABORATORIO Y DE GRANJA ES UN OBJETIVO CON GRAN POTENCIAL ECONOMICO Y SOCIAL. LAS APLICACIONES SON EVIDENTES TANTO EN ESPECIES DOMESTICAS DONDE SE PODRIA AUMENTAR LA PRODUCCION DE LECHE SIN AUMENTAR LA CARGA GANADERA CON EL CONSIGUIENTE IMPACTO ECONOMICO Y AMBIENTAL, Y EN ESPECIES DE LABORATORIO, PRINCIPALMENTE ROEDORES, YA QUE PERMITIRIA REDUCIR DRASTICAMENTE UN GRAN NUMERO DE MACHOS QUE GENERALMENTE NO SE APROVECHAN Y SE SACRIFICAN. PARA LOGRARLO, SE PLANEA REDUCIR LA CAPACIDAD FECUNDANTE DE LOS ESPERMATOZOIDES PORTADORES DEL CRO Y (EDITANDO EL CRO Y), EN BENEFICIO DE LOS ESPERMATOZOIDES PORTADORES DEL CRO X Y FAVORECIENDO EL NACIMIENTO DE LAS HEMBRAS, QUE AL NO LLEVAR EL CRO Y NO INCORPORAN NINGUNA MODIFICACION GENETICA QUE PODRIA EVITAR SU COMERCIALIZACION.LA MANIPULACION GENETICA DEL CRO Y HA SIDO TECNICAMENTE MUY COMPLEJA, PERO LA PERSPECTIVA HA CAMBIADO GRACIAS AL DESARROLLO DE NUCLEASAS ESPECIFICAS DE SECUENCIAS DE EDICION. EN NUESTRO PROYECTO RTI2018-093548-B-I00, HEMOS DESARROLLADO UNA ESTRATEGIA USANDO CRISPR, QUE ELIMINA VARIAS COPIAS DE UN GEN MULTICOPIA DEL CRO Y SSTY2, QUE ESTA EN CONFLICTO CON EL GEN MULTICOPIA SSTX DEL CRO X; ESTOS MACHOS CON UNA DELECION PARCIAL DE SSTY2 PRODUCEN DESCENDENCIA CON UNA PROPORCION DE SEXOS SESGADA HACIA LAS HEMBRAS. EN ESTE PROYECTO EL PRIMER OBJETIVO ES PATENTAR LA METODOLOGIA UTILIZADA PARA EDITAR CUALQUIER ESTIRPE DE RATONES Y ELIMINAR REPETICIONES DEL GEN SSTY2 O SSTX PARA PRODUCIR ALTERACIONES EN LA SEX RATIO. EL SEGUNDO OBJETIVO ES DERIVAR COMERCIALMENTE RATONES CON DELECCIONES EN EL NUMERO DE COPIAS DE SSTY2 AL FONDO C57BL6 Y CD1 DURANTE 7 GENERACIONES Y OFRECERLOS A EMPRESAS QUE VENDEN ANIMALES DE LABORATORIO (ENVIGO, JACKSON, CHARLE RIVER, ETC.) PARA QUE PUEDAN COMERCIALIZARLOS, POR SU GRAN VENTAJA EN LA PRODUCCION DE HEMBRAS Y POR LO TANTO EN REDUCCION DE ANIMALES NECESARIOS. NUESTRO PROPOSITO ES DESARROLLAR ESTA TECNOLOGIA PARA QUE EN EL GANADO BOVINO DE LECHE SE PRODUZCAN TOROS CUYA DESCENDENCIA SEA MAYORITARIAMENTE DE HEMBRAS, LAS CUALES ESTARAN LIBRES DEL TRANSGEN. COMO YA HEMOS VISTO EN RATONES, LA COMPETICION ENTRE CIERTOS GENES DE LOS CRO X-Y PUEDE SER UNA MANIFESTACION DE LA EVOLUCION GENETICA QUE CONTROLA LA PROPORCION DE SEXOS. NOSOTROS PLANTEAMOS LA HIPOTESIS DE QUE, EN LAS ESPECIES BOVINA Y OVINA, ESTA COMPETICION PUEDE SER PRODUCIDO POR LOS GENES MULTICOPIA PRESENTES EN LOS CROS Y Y X, HSFY/HSFX, Y QUE LA ELIMINACION DE VARIAS COPIAS DE HSFY AFECTARA LA MOTILIDAD DE LOS ESPERMATOZOIDES PORTADORES DEL CRO Y, AUMENTANDO LA PROPORCION DE NACIMIENTOS DE HEMBRAS. EL TERCER OBJETIVO ES IMPLEMENTAR EN OVEJAS EL SISTEMA DESARROLLADO EN RATONES, PRODUCIENDO LA ELIMINACION DE PARTE DE LAS COPIAS DE HSFY O HSFX EN CARNEROS Y ANALIZANDO EL EFECTO SOBRE LA PROPORCION DE SEXOS. EN ESTE PROYECTO UTILIZAREMOS CARNEROS, YA QUE LA GESTACION Y LA MADURACION SEXUAL ES MUCHO MENOR QUE EN LOS TOROS. DE ESTA FORMA UTILIZAREMOS A LAS OVEJAS COMO PRUEBA DE CONCEPTO PARA EL USO DE NUESTRA TECNOLOGIA EN BOVINOS. ANALIZAREMOS LOS MACHOS EDITADOS POR FECUNDACION IN VITRO UTILIZANDO SU SEMEN Y SEXANDO LOS EMBRIONES PRODUCIDOS, DETERMINANDO ASI EL EFECTO SOBRE LA SEX RATIO DE LA EDICION HSFY. CON ESTA ESTRATEGIA AFECTAREMOS LA MOTILIDAD DE LOS ESPERMATOZOIDES PORTADORES DEL CRO Y, PERMITIENDO LA FECUNDACION PREFERENCIAL CON PORTADORES DEL CRO X Y DISTORSIONANDO LA PROPORCION DE SEXOS A FAVOR DE AQUELLOS CON MAYOR INTERES ECONOMICO.