Descripción del proyecto
LA LEISHMANIOSIS ES UNA ZOONOSIS QUE AFECTA A 15 MILLONES DE PERSONAS EN EL MUNDO CUYO RESERVORIO PRINCIPAL ES EL PERRO, SIENDO ENDEMICA EN LA CUENCA MEDITERRANEA, SE HA DESARROLLADO UNA VACUNA QUE PROPORCIONA CIERTO NIVEL DE PROTECCION FRENTE A LA ENFERMEDAD Y QUE TAMBIEN SIRVE COMO MODELO PARA LA DETERMINACION DE PARAMETROS QUE DEFINEN LA RESPUESTA INMUNE TANTO DE DESDE EL PUNTO DE VISTA HUMORAL COMO CELULAR FRENTE A LA INFECCION EXPERIMENTAL, CON ESTE PROYECTO SE PRETENDE DETERMINAR NUEVOS GENES QUE CODIFIQUEN PARA ANTIGENOS PROTECTORES MEDIANTE EL USO DE MICROARRAYS DE ADN CONSTRUIDOS A PARTIR DE UNA GENOTECA COMPLETA DE LEISHMANIA INFANTUM, Y ASI ELABORAR UNA NUEVA VACUNA MAS EFICAZ Y SEGURA, ESTOS GENES SE SOBRE-EXPRESARAN EN TRANSFECTANTES ESTABLES DE L, INFANTUM Y SE DETERMINARA IN VITRO CUALES MEJORAN LA CAPACIDAD DE INFECCION DEL PROTOZOO, LOS GENES SELECCIONADOS SERAN CLONADOS EN PLASMIDOS RECOMBINANTES QUE CONTENGAN TAMBIEN EL GEN DE LA IL-12 COMO ADYUVANTE, ADEMAS DE SECUENCIAS DE DIRECCIONAMIENTO AL RETICULO ENDOPLASMICO PARA FAVORECER SU PRESENTACION POR LA VIA DE MHCII, SE ANALIZARA EL NIVEL DE PROTECCION DE ESTA NUEVA VACUNA DE ADN EN HAMSTER Y EN PERRO, EN EL CASO DEL PERRO TAMBIEN SE ANALIZARA LA EXPRESION DIFERENCIAL DE GENES ACTIVADOS INDUCIDA POR LA VACUNA EN CELULAS DE GANGLIO LINFATICO MEDIANTE MICROARRAYS DE OLIGONUCLEOTIDOS DE ESTE HOSPEDADOR, FINALMENTE SE COMPROBARA EL NIVEL DE EXPRESION DE LOS GENES INDUCIDOS POR LA VACUNA EN ANIMALES INFECTADOS DE FORMA NATURAL COMPARANDO LOS ENFERMOS CON LOS QUE NO HAN SUPERADO LA INFECCION, ESTE PROYECTO PROPONE 1) ANALISIS DEL PERFIL DE EXPRESION GENICA DE LOS PROMASTIGOTES METACICLICOS AISLADOS EN EL INSECTO VECTOR EN EL MOMENTO DE LA INFECCION Y SELECCION DE CUATRO DE LOS GENES INDUCIDOS PARA SU ESTUDIO COMO POSIBLES CANDIDATOS PARA EL DESARROLLO DE UNA VACUNA FRENTE A LA INFECCION POR L, INFANTUM, 2) OBTENCION DE TRANSFECTANTES EPISOMALES ESTABLES DE L, INFANTUM QUE SOBRE-EXPRESEN LOS GENES SELECCIONADOS EN EL OBJETIVO 1, 3) DETERMINACION DE LOS DOS GENES CANDIDATOS PARA EL DESARROLLO DE LA VACUNA MEDIANTE ENSAYOS DE INFECCION IN VITRO DE LOS TRANSFECTANTES GENERADOS, 4) ELABORACION DE LOS PLASMIDOS RECOMBINANTES QUE CONTENGAN LOS GENES CANDIDATOS SELECCIONADOS EN EL OBJETIVO 3 ADEMAS DE POTENCIADORES DE LA EXPRESION Y DE LA INMUNOGENICIDAD, 5) ENSAYO DE LA VACUNA CON VEHICULOS QUE CONTENGAN LOS NUEVOS GENES PROTECTORES EN DOS MODELOS ANIMALES: HAMSTERS Y PERRO, 6) DETERMINACION DE LOS GENES ACTIVADOS EN LAS CELULAS IMPLICADAS EN LA RESPUESTA INMUNE DE RESISTENCIA A LA ENFERMEDAD EN EL GANGLIO LINFATICO EN LOS PERROS PROTEGIDOS Y SU COMPROBACION EN PERROS QUE HAN SUPERADO LA INFECCION NATURAL, COMPARADO CON OTROS QUE NO DE LA MISMA CAMADA VACUNAS\L.INFANTUM\LEISHMANIOSIS\MICROARRAYS\INFECCION EXPERIMENTAL\GENES PROTECTORES\ACTIVACION S.I.