Descripción del proyecto
LAS CELULAS GANGLIONARES DE LA RETINA (CGR) ASIENTAN EN LA CAPA RETINIANA MAS INTERNA Y SUS AXONES CONVERGEN PARA FORMAR EL NERVIO OPTICO QUE CONDUCE INFORMACION VISUAL PROCESADA EN LA RETINA A LOS PRINCIPALES TERRITORIOS DE PROYECCION SUBCORTICAL, EL GLAUCOMA ES UNA ENFERMEDAD HUMANA NEURODEGENERATIVA PROGRESIVA QUE CONDUCE A LA CEGUERA IRREVERSIBLE, CUYA CARACTERISTICA ES LA DEGENERACION Y MUERTE DE CGR, LA ELEVACION DE LA PRESION INTRAOCULAR (PIO) ES UNO DE LOS FACTORES DE RIESGO MAS IMPORTANTES ASOCIADOS AL GLAUCOMA, Y LA UNICA VARIABLE PARA LA QUE SE HAN DESARROLLADO TRATAMIENTOS MEDICO-QUIRURGICOS EN UN INTENTO DE CONTROLAR O ENLENTECER SU PROGRESION, PARA COMPRENDER MEJOR LOS MECANISMOS POR LOS QUE LA PIO ELEVADA CAUSA DAÑO RETINIANO, EN ESTE PROYECTO UTILIZAREMOS UN MODELO DE HIPERTENSION OCULAR (HTO) EN ROEDORES ADULTOS (VIDAL SANZ ET AL,, 2015A), LOS PRINCIPALES OBJETIVOS PLNTEADOS SON: I) LA HTO PROVOCA LA MISMA RESPUESTA EN TODOS LOS TIPOS DE CGR, INCLUIDAS LAS CGR INTRINSECAMENTE FOTOSENSIBLES (CGRIF)?; II) ESTA MEDIADA LA RESPUESTA CONTRALATERAL A LA HTO POR LA VIA RETINO-RETINIANA?; III) ES POSIBLE PREVENIR LA MUERTE DE CGR Y DE CONOS INDUCIDA POR LA HTO?; IV) QUE PROTEINAS PRO-MUERTE Y/O INFLAMATORIAS SE SOBRE-EXPRESAN EN LA RETINA TRAS LA HTO?, Y; V) ES UN SIGNO TEMPRANO DE LA NEUROPATIA INDUCIDA POR HTO LA ALTERACION DE LA CAPA DE FIBRAS DE LA RETINA? EN RATAS Y RATONES LAS VENAS LIMBARES, PERILIMBARES Y EPICLERALES DEL OJO IZQUIERDO SE FOTOCAUTERIZARAN CON LASER DIODO PARA INDUCIR HTO Y LOS EFECTOS SE INVESTIGARAN ENTRE 1 SEMANA Y 6 MESES DESPUES, PARA INVESTIGAR LAS CAPAS MAS INTERNAS, LAS RETINAS SE EXAMINARAN EN MONTAJES GLOBALES UTILIZANDO TRAZADORES APLICADOS EN AMBOS COLICULOS SUPERIORES PARA IDENTIFICAR LAS CGR CON TRANSPORTE AXONAL RETROGRADO FUNCIONAL, O IMMUNODETECCION CON MELANOPSINA, RT97 O RECA-1 PARA IDENTIFICAR LAS CGR INTRINSECAMENTE FOTOSENSIBLES (CGRIF), LA CAPA DE FIBRAS DE LA RETINA O LOS VASOS INTERNOS DE LA RETINA, ASI COMO CONTRA-TINCION CON DAPI PARA DETECTAR TODOS LOS NUCLEOS DE LA CAPA DE CG, LAS CAPAS EXTERNAS DE LA RETINA SE EXAMINARAN EN SECCIONES RADIALES CON TECNICAS MORFOMETRICAS O EN MONTAJES GLOBALES PARA ESTUDIAR CONOS S Y L, LAS RECONSTRUCCIONES DE LOS MONTAJES GLOBALES SE OBTENDRAN EN EL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA, CONTAJES TOTALES DE CONOS O CGR TRAZADAS O MARCADAS CON BRN3A, SE OBTENDRAN UTILIZANDO RUTINAS AUTOMATICAS DESARROLLADAS POR NUESTRO GRUPO, Y ESTOS PERMITIRAN CONSTRUIR MAPAS DE ISODENSIDAD PARA ESTUDIAR LA DISTRIBUCION REGIONAL Y SU TOPOGRAFIA, PARA ANALIZAR LA DISTRIBUCION DE PEQUEÑAS POBLACIONES NEURONALES UTILIZAREMOS EL ALGORITMO DEL VECINO MAS PROXIMO CON UN RADIO FIJO PARA PRODUCIR MAPAS DE VECINOS, LAS MEDIDAS DE LA TOMOGRAFIA OPTICA DE COHERENCIA DE DOMINIO ESPECTRAL, DE LOS WESTERN BLOTS Y DE LA PCR CUANTITATIVA SE OBTENDRAN SEGUN PROTOCOLOS DESCRITOS QUE SON ESTANDAR EN NUESTRO LABORATORIO, LOS DATOS OBTENIDOS SE ANALIZARAN ESTADISTICAMENTE, ESTE PROYECTO MEJORARA NUESTRA COMPRENSION DE LOS MECANISMOS RESPONSABLES DE LA NEURODEGENERACION PROGRESIVA DE LAS CGR INDUCIDA POR LA HTO Y SERVIRA PARA ENTENDER MEJOR EL GLAUCOMA HUMANO, ADEMAS SE EMPLEARAN NUMEROSAS NUEVAS TECNOLOGIAS DESARROLLADAS POR NUESTRO GRUPO, UNICAS EN ESTE CAMPO DE TRABAJO, QUE SE APLICARAN A ESTE PROYECTO Y QUE PODRAN SERVIR DE BASE PARA ESTUDIOS FUTUROS EN OTRAS ENFERMEDADES HUMANAS NEURODEGENERATIVAS INCURABLES PARA LAS QUE EN LA ACTUALIDAD NO EXISTE TRATAMIENTO, PRESIÓN INTRAOCULAR\NEUROPATÍA ÓPTICA GLAUCOMATOSA\HIPERTENSIÓN OCULAR\DEGENERACIÓN DE LA RETINA\GLAUCOMA