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BFU2014-54194-P

Financiado

CONTROL GENETICO DEL DESARROLLO MUSCULAR EN MAMIFEROS

LOS FACTORES DE REGULACION MIOGENICA (MRFS) SON UNA FAMILIA DE FACTORES DE TRANSCRIPCION ESENCIALES EN LA DETERMINACION, ESPECIFICACION Y DIFERENCIACION DE MUSCULO ESQUELETICO DURANTE EL DESARROLLO EMBRIONARIO, DOS MRFS, MRF4 Y MY... ver más

01/01/2014

UPO

Presupuesto desconocido

Líder del proyecto

UNIVERSIDAD PABLO DE OLAVIDE, DE SEVILLA No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

Total investigadores 3

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2014-01-01

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Participantes

UPO

Lider

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Líder del proyecto

UNIVERSIDAD PABLO DE OLAVIDE, DE SEVILLA

Total investigadores 3

Descripción del proyecto LOS FACTORES DE REGULACION MIOGENICA (MRFS) SON UNA FAMILIA DE FACTORES DE TRANSCRIPCION ESENCIALES EN LA DETERMINACION, ESPECIFICACION Y DIFERENCIACION DE MUSCULO ESQUELETICO DURANTE EL DESARROLLO EMBRIONARIO, DOS MRFS, MRF4 Y MYF5, SE ENCUENTRAN LIGADOS EN TODOS LOS VERTEBRADOS, Y EN EL GENOMA MURINO SEPARADOS POR 8,7KB,DURANTE LOS ULTIMOS 15 AÑOS HEMOS ESTUDIADO LA REGULACION TRANSCRIPCIONAL DE MRF4 Y MYF5 Y DESCUBIERTO QUE EXISTE UNA MULTITUD DE ELEMENTOS QUE DIRIGEN LA EXPRESION DE LOS DOS GENES A LO LARGO DEL DESARROLLO, HEMOS GENERADO UN NUEVO KO EN EL QUE SE ELIMINO EL ELEMENTO QUE CONTROLA LA EXPRESION DE MYF5 EN PROGENITORES SOMITICOS DORSALES, ESTO NOS HA PERMITIDO DESCUBRIR LAS REDES DE REGULACION GENICA CONTROLADAS DIRECTA O INDIRECTAMENTE POR MYF5 EN ESTOS PROGENITORES, AUN QUEDA POR ELUCIDAR SI ESTAS REDES SERAN COMUNES EN OTROS PROGENITORES MUSCULARES; ESTE ES UN OBJETIVO ESENCIAL DE ESTE PROYECTO, PARA REVELAR EL FENOTIPO DE MYF5, HEMOS CRUZADO EL NUEVO KO CON EL DE MYOD, Y OBTENIDO UN FENOTIPO LETAL QUE INCLUYE MALFORMACIONES MUSCULARES Y ESQUELETICAS, ESTO SUGIERE QUE EL DESARROLLO DE MUSCULOS Y HUESOS PUEDE ESTAR CONTROLADO POR SISTEMAS DE REGULACION CRUZADA ENTRE LOS DOS COMPARTIMENTOS, PROPONEMOS INVESTIGAR LA RELACION ENTRE PROGENITORES MUSCULARES ESPECIFICOS Y LOS MUSCULOS QUE DE ELLOS DERIVAN, PARA ELLO, EMPLEAREMOS LAS NUEVAS TECNICAS DE CRISPR/CAS9 PARA ELIMINAR TRES ELEMENTOS REGULADORES DISTINTOS QUE ACTUAN SOBRE PROGENITORES DE DISTINTO ORIGEN MESODERMICO, ESTO SE COMPLEMENTA CON EXPERIMENTOS BASICOS DE MARCAJE PARA DETERMINAR LA CONTRIBUCION DE ESTOS REGULADORES A LA MUSCULATURA ADULTA,PESE A LA COMPLEJA ORGANIZACION DEL LOCUS MRF4/MYF5, CON MAS DE 23 ENHANCERS DESCRITOS, LOS ELEMENTOS REGULADORES SON CAPACES DE RECONOCER SU PROMOTOR ESPECIFICO, ESTE PROCESO DEPENDE DE UNA SERIE DE ESTADOS DE EQUILIBRIO ENTRE SECUENCIAS BALANCEADORAS DE TRANSCRIPCION (TRABS), PROMOTORES Y ENHANCERS QUE ACTUAN PARA DIRIGIR CORRECTAMENTE LA EXPRESION GENICA, MEDIANTE EL USO DE SISTEMAS BIOINFORMATICOS Y EXPERIMENTALES HEMOS IDENTIFICADO VARIOS LUGARES DE UNION A LA MATRIZ NUCLEAR, UNO DE LOS CUALES COINCIDE EXACTAMENTE CON EL ELEMENTO TRABS EN POSICION +1KB, ADEMAS, HEMOS IDENTIFICADO MEDIANTE CHIP VARIOS LUGARES DE UNION AL FACTOR CTCF, CONSIDERADO COMO UN FACTOR DE ORGANIZACION TRIDIMENSIONAL DEL GENOMA, EL USO DE TECNOLOGIAS DE 4CSEQ NOS HA PERMITIDO DETERMINAR CUAL ES LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DEL LOCUS A LO LARGO DEL DESARROLLO EMBRIONARIO E IDENTIFICAR REGIONES QUE SE ENCUENTRAN EN CONTACTO CON LOS PROMOTORES DE MYF5 Y MRF4 A LAS QUE NO SE LES HABIA ASIGNADO FUNCION ALGUNA, AHORA UTILIZAREMOS CRISPR/CAS9 PARA ELIMINAR DEL GENOMA ALGUNOS DE ESTOS SITIOS IDENTIFICADOS, ESTUDIAR SU IMPORTANCIA FUNCIONAL IN VIVO Y EL IMPACTO QUE SU AUSENCIA PUEDA TENER SOBRE LA REGULACION DEL LOCUS,FINALMENTE, PROPONEMOS GENERAR UNA NUEVA LINEA TRANSGENICA EN LA QUE UNA SECUENCIA TAP-TAG ESTE FUSIONADA CON MYF5, Y SE UTILIZARA PARA DETERMINAR SUS GENES DIANA MEDIANTE CHIPSEQ,ESTOS RESULTADOS SERAN ESENCIALES PARA ENTENDER LA FUNCION DE MYF5, LA CONTRIBUCION DE S/MARS Y CTCF A LA ESTRUCTURA 3D DE LA CROMATINA Y LA REGULACION GENICA AL MISMO TIEMPO QUE PRODUCIRA UN MAPA COMPLETO DE LOS SITIOS DIANA PARA MYF5, ESE PROYECTO PUEDE QUE NOS AYUDE A ENTENDER EL DESARROLLO DE ALGUNAS DISTROFIAS MUSCULARES HUMANAS EN LAS QUE LA ENFERMEDAD AFECTA PREDOMINANTEMENTE A GRUPOS ESPECIFICOS DE MUSCULOS ADULTOS, REGULACIÓN TRANSCRIPCIONAL\MYF5\MIOGÉNESIS\ENHANCER\PROMOTOR\RATÓN\KNOCKOUT\CRISPR/CAS9\4CSEQ

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