CONTRIBUCION DE LA SEÑALIZACION POR UBIQUITINA Y SUMO EN LA DIFERENCIACION DEL F...
CONTRIBUCION DE LA SEÑALIZACION POR UBIQUITINA Y SUMO EN LA DIFERENCIACION DEL FOTORECEPTOR
DILUCIDAR COMO UNA ENFERMEDAD SE DESARROLLA DESDE UN ESTADO INICIAL FISIOLOGICAMENTE NORMAL ES UNO DE LOS MAYORES RETOS EN LA GENETICA HUMANA, PARTICULARMENTE EN PATOLOGIAS QUE PROGRESAN CON LA EDAD, COMO LAS DISTROFIAS RETINIANAS...
DILUCIDAR COMO UNA ENFERMEDAD SE DESARROLLA DESDE UN ESTADO INICIAL FISIOLOGICAMENTE NORMAL ES UNO DE LOS MAYORES RETOS EN LA GENETICA HUMANA, PARTICULARMENTE EN PATOLOGIAS QUE PROGRESAN CON LA EDAD, COMO LAS DISTROFIAS RETINIANAS, UNA ENFERMEDAD NEURODEGENERATIVA, LAS DISTROFIAS RETINIANAS HEREDITARIAS GRAVES (PREVALENCIA DE 1:4,000) SUFREN UNA PERDIDA PROGRESIVA DE FOTORECEPTORES POR APOPTOSIS, CAUSANDO FINALMENTE CEGUERA, LA MAYORIA DE VIAS MOLECULARES IMPLICADAS EN EL DESARROLLO DE LA RETINA Y EN LA MUERTE DE FOTORECEPTORES SON LAS MISMAS QUE INTERVIENEN EN UNA RETINA SANA Y SON DISFUNCIONALES EN LA RETINA DISTROFICA, POR TANTO, DILUCIDAR LAS PRIMERAS ES CRUCIAL PARA ENTENDER LAS SEGUNDAS, SIN EMBARGO, LAS SEÑALES MOLECULARES DE DIFERENCIACION DE CONOS Y BASTONES NO SE CONOCEN BIEN, NI TAMPOCO LAS VIAS POR LAS QUE SE ACTIVA LA APOPTOSIS DE LOS FOTORECEPTORES, SUBYACENTE A LAS DISTROFIAS RETINIANAS, SE CONOCEN MUCHOS GENES CAUSALES DE DISTROFIAS RETINIANAS Y TODOS CODIFICAN PARA PROTEINAS RELEVANTES PARA LA FUNCION DE LOS FOTORECEPTORES, DESDE LA FOTOTRANSDUCCION A LA ESTRUCTURA CELULAR, O FACTORES DE TRANSCRIPCION Y DE SPLICING, VARIOS FACTORES DE TRANSCRIPCION CONTROLAN DECISIONES DE DESTINO CELULAR, TANTO DURANTE LA DIFERENCIACION DE LAS DISTINTAS NEURONAS DE LA RETINA, COMO EN LOS PRECURSORES DE FOTORECEPTORES CUANDO SE DIFERENCIAN EN CONOS O BIEN BASTONES, ALGUNOS DE ESTOS PROCESOS SON ACTIVADOS O DESACTIVADOS A MODO DE INTERRUPTOR, Y SE CONTROLAN DE FORMA MUY PRECISA PARA RESPONDER A LAS NECESIDADES CELULARES, UNO DE LOS MECANISMOS MAS VERSATILES Y REVERSIBLES PARA REGULAR LA ACTIVIDAD PROTEICA ES LA MODIFICACION POST-TRADUCCIONAL MEDIANTE LA CONJUGACION DE UBIQUITINA (UB) Y MOLECULAS SIMILARES A UBICUITINA (UBLS, SIENDO SUMO LA MAS ESTUDIADA), COMO HA SIDO DEMOSTRADO PARA EL FACTOR DE TRANSCRIPCION DE RETINA NR2E3, TODO ELLO CONVERGE EN LA HIPOTESIS PRINCIPAL DE ESTE PROYECTO: LA MODIFICACION POST-TRADUCCIONAL MEDIANTE UBIQUITINA Y SUMO DE FACTORES DE TRANSCRIPCION CLAVES EN LA REGULACION DE LAS DECISIONES DE DIFERENCIACION DE LOS FOTORECEPTORES, PARTICULARMENTE EN LAS DETERMINACION ENTRE LOS DESTINOS OPUESTOS DE DE CONO Y BASTON, EN CONCRETO, ESTE PROYECTO ABORDARA ESTOS TRES OBJETIVOS: 1) ANALIZAR LA EXPRESION DE TODO EL CATALOGO DE ENZIMAS DEUBIQUITINANTE (DUBS) EN RETINA HUMANA Y DE RATON MEDIANTE RT-PCR, TRANSFERENCIA WESTERN E INMUNOLOCALIZACION; 2) ESTUDIAR LA CONTRIBUCION DE LA MODIFICACION POR UBIQUITINA Y SUMO EN LAS DECISIONES TEMPRANAS DE LA DIFERENCIACION DEL FOTORECEPTOR, MEDIANTE UNA ESTRATEGIA DE CRIBADO SHOTGUN DE UNA SUBLIBRERIA DE SHRNAS CONTRA DUBS Y ENZIMAS RELACIONADOS CON LA VIA DE SUMO EN UNA PLATAFORMA DE SILENCIAMIENTO GENICO; EL ENSAYO DEL EFECTO DE CADA KNOCKDOWN SOBRE LA EXPRESION DE GENES MARCADORES DE CONOS Y BASTONES EN CELULAS EN CULTIVO DE RETINA SE CONTINUARA EN LA BUSQUEDA DE PUTATIVAS PROTEINAS DIANA DE LA MODIFICACION POR UB Y SUMO; Y FINALMENTE 3) BUSCAR PUTATIVOS SUBSTRATOS DE LA LIGASA E3 DE UBIQUITINAS KLHL7, CODIFICADA POR UNO DE LOS GENES RESPONSABLES DE RETINITIS PIGMENTOSA MEDIANTE ENSAYOS DE DOS HIBRIDOS E INMUNOPRECIPITACION, ESPERAMOS QUE LOS RESULTADOS QUE SE OBTENGAN NO SOLAMENTE CONTRIBUYAN A ENTENDER ALGUNOS DE LOS MECANISMOS POR LOS QUE LOS PRECURSORES DE LOS FOTORECEPTORES DETERMINAN SU DIFERENCIACION O ACTIVAN LA VIA APOPTOTICA, SINO TAMBIEN COMO LA DISRUPCION DE ESTOS MECANISMOS CAUSA DISTROFIAS DE RETINA, OBVIAMENTE, ALGUNAS DE LAS DIANAS IDENTIFICADAS DURANTE EL PROYECver más
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