Descripción del proyecto
LAS FICOTOXINAS PRODUCIDAS POR ALGUNAS ESPECIES DE FITOPLANCTON Y ACUMULADAS POR LOS MOLUSCOS BIVALVOS, SON UNO DE LOS MAS IMPORTANTES PROBLEMAS DE LA EXPLOTACION Y CULTIVO DE LOS BIVALVOS EN GALICIA Y EN MUCHAS OTRAS PARTES DE ESPAÑA. DE ENTRE ESTAS TOXINAS UNAS DE LAS QUE TIENEN MAYOR REPERCUSION EN GALICIA SON LAS DE TIPO ASP (QUE CAUSAN LA INTOXICACION AMNESICA POR MARISCOS), PUES VIENEN PRODUCIENDO CIERRES MUY LARGOS, INCLUSO DE AÑOS, DE LA EXPLOTACION DE LA VIEIRA PECTEN MAXIMUS. LA PRINCIPAL TOXINA ASP, EL ACIDO DOMOICO, ES UN AMINOACIDO TRICARBOXILICO QUE SE UNE A LOS RECEPTORES DEL GLUTAMATO. EN DISTINTAS ESPECIES DE MOLUSCOS BIVALVOS EXISTEN GRANDES DIFERENCIAS EN CUANTO A LA CAPACIDAD DE ELIMINACION DEL ACIDO DOMOICO. EL MEJILLON O LA OSTRA TIENEN TASAS DE DEPURACION ALTAS, MIENTRAS QUE LA VIEIRA TIENE TASAS DE DEPURACION MUY BAJAS. POR ELLO, EL ACIDO DOMOICO SE ACUMULA EN LA GLANDULA DIGESTIVA DE LA VIEIRA PECTEN MAXIMUS DURANTE PERIODOS MUCHO MAS LARGOS QUE EN OTROS BIVALVOS, LO CUAL IMPIDE QUE ESTA ESPECIE SEA UTILIZADA EN ACUICULTURA Y DIFICULTA SUSTANCIALMENTE LA EXPLOTACION DE SUS POBLACIONES NATURALES.EL CONOCIMIENTO ACERCA DE LOS MECANISMOS DE ABSORCION, DISTRIBUCION, METABOLISMO Y EXCRECION DEL ACIDO DOMOICO EN LOS MOLUSCOS BIVALVOS ES MUY LIMITADO. EL PRINCIPAL OBJETIVO DEL SUBPROYECTO ES IDENTIFICAR GENES QUE PUEDAN ESTAR IMPLICADOS EN LA ELIMINACION DEL ACIDO DOMOICO EN LOS MOLUSCOS BIVALVOS. UTILIZAREMOS PARA ELLO DOS ESPECIES: UN BIVALVO CON TASA DE DEPURACION DEL ACIDO DOMOICO ALTA (EL MEJILLON MYTILUS GALLOPROVINCIALIS) Y UN BIVALVO CON UNA TASA DE DEPURACION BAJA (LA VIEIRA PECTEN MAXIMUS).LAS TECNICAS DE TRANSCRIPTOMICA NOS PERMITEN HACER UNA APROXIMACION METODOLOGICA A ESTE FENOMENO BUSCANDO GENES EXPRESADOS DIFERENCIALMENTE EN MOLUSCOS INTOXICADOS EN RELACION A LOS MOLUSCOS SIN INTOXICAR (MEDIANTE LA EXPOSICION DE VIEIRAS Y MEJILLONES A CELULAS TOXICAS Y ACIDO DOMOICO LIBRE), ESTO NOS PERMITIRA IDENTIFICAR GENES POTENCIALMENTE IMPLICADOS EN LOS PROCESOS DE DE DEPURACION DEL ACIDO DOMOICO.LA IDENTIFICACION DE GENES EXPRESADOS DIFERENCIALMENTE EN DISTINTOS TEJIDOS Y SITUACIONES EN MOLUSCOS BIVALVOS SE REALIZARA MEDIANTE SECUENCIACION DEL TRANSCRIPTOMA (SECUENCIACION MASIVA EN PARALELO) POR PIROSECUENCIACIACION. SE REALIZARAN LIBRERIAS DE CDNA NO NORMALIZADAS DE CADA TEJIDO (GLANDULA DIGESTIVA DE MEJILLON, GLANDULA DIGESTIVA DE VIEIRA, BRANQUIA DE VIEIRA) Y SITUACION (ANIMALES CONTROL SIN INTOXICAR Y ANIMALES INTOXICADOS CON ACIDO DOMOICO) LO QUE PERMITIRA LA COMPARACION DE LOS PERFILES DE EXPRESION ENTRE MUESTRAS. UNA VEZ OBTENIDAS LAS SECUENCIAS SE REALIZARA EL ANALISIS (BUSQUEDA DE SIMILITUDES EN BASES DE DATOS DEL GENBANK Y DEL EMBL-EBI ) Y ANOTACION DE LAS MISMAS.DE ALGUNOS GENES CANDIDATOS EXPRESADOS DIFERENCIALMENTE SE EVALUARA SU EXPRESION EN TEJIDOS (GLANDULA DIGESTIVA Y BRANQUIA) DE MEJILLONES Y VIERIAS CON Y SIN ACIDO DOMOICO POR PCR EN TIEMPO REAL CUANTITATIVA (RT-QPCR). SE ELEGIRAN AQUELLOS GENES CANDIDATOS QUE SEAN MAS INTERESANTES BASANDOSE EN SU POSIBLE FUNCION DEDUCIDA A PARTIR DE SU SIMILITUD CON GENES CONOCIDOS DE OTRAS ESPECIES. SE ANALIZARA TAMBIEN LA EXPRESION DE GENES DE MULTIRRESISTENCIA FRENTE A XENOBIOTICOS (MXR) YA CARACTERIZADOS POR NUESTRO EQUIPO EN EL MEJILLON, MYTILUS GALLOPROVINCIALIS, QUE CODIFICAN PARA TRANSPORTADORES DE MEMBRANA IMPLICADOS EN LA EXPULSION DE NUMEROSOS XENOBIOTICOS.