Descripción del proyecto
LOS NEMATODOS FITOPATOGENOS FORMADORES DE AGALLAS, SON UN GRAVE PROBLEMA ECONOMICO, PARA SU CONTROL NO EXISTE AUN UN METODO REALMENTE EFECTIVO Y DURADERO, YA QUE EL MENOS COSTOSO, LA RESISTENCIA NATURAL MEDIADA POR MI, POSEE PROBLEMAS ASOCIADOS A LA APARICION DE POBLACIONES VIRULENTAS DEL NEMATODO, Y SE LIMITA A DETERMINADAS ESPECIES, EL USO DE AGROQUIMICOS ALTAMENTE TOXICOS Y CONTAMINANTES, ESTA YA EXTREMADAMENTE RESTRINGIDO A PARTIR DEL 2010, POR ELLO ES NECESARIA LA BUSQUEDA DE OTRAS ALTERNATIVAS MAS RESPETUOSAS CON EL MEDIO, SE HA AVANZADO EN EL CONOCIMIENTO GLOBAL DE LOS CAMBIOS TRANSCRIPCIONALES QUE OCURREN DURANTE LA INTERACCION COMPATIBLE, PERO EL CONOCIMIENTO DE LOS MECANISMOS QUE SUBYACEN EL ESTABLECIMIENTO DEL PARASITO ES MUY ESCASO, POR ELLO, PROPONEMOS AHONDAR EN LAS BASES BIOLOGICAS DE LA DIFERENCIACION DESDE SUS CEL, PRECURSORAS (CPS) A LAS CELULAS GIGANTES (CGS) NECESARIAS PARA SU ALIMENTACION, HAREMOS USO DE NUESTRO CONOCIMIENTO EN EL MARCO DE LOS ANTERIORES PROYECTOS (AGL2007-60273; AGL2004-08103-C02-02/AGR) TALES COMO, LA REPRESION GENICA MASIVA QUE OCURRE SOLO A 3 DPI EN CGS (MICRODISECCIONADAS POR LASER; LCM) Y NO EN AGALLAS DEL MISMO TIEMPO DE INFECCION (3DPI), PROCESO CONSERVADO EN TOMATE Y ARABIDOPSIS, LO QUE SUGIERE, QUE PUDIERAN EXISTIR MECANISMOS ESPECIFICOS DE SILENCIAMIENTO GENICO NECESARIOS PARA EL LA DIFERENCIACION DE LAS CGS, A PARTIR DE SUS CPS DEL XILEMA, ALGUNAS EVIDENCIAS SON LA ACUMULACION DE LOS TRANSCRITOS DEL PRECURSOR DE UN MICROARN Y LA REPRESION DE SU GEN DIANA EN CGS DE 3 DPI EN ARABIDOPSIS, ESTUDIAREMOS POSIBLES MICROARNS QUE PUEDAN MEDIAR ESTA RESPUESTA Y SUS CAMBIOS DE EXPRESION EN LAS CPS DIFFERENCIANDOSE A CGS, PARTE DE LOS GENES ALTERADOS DE MANERA ESPECIFICA EN LAS CGS, CODIFICAN FACTORES DE TRANSCRIPCION, Y OTROS PUEDEN SER CRITICOS EN PROCESOS DE CONTROL EPIGENETICO, SE PLANTEA ENTONCES LA NECESIDAD DE AHONDAR EN EL PAPEL DE ESTOS GENES EN LAS CGS, PERO ADEMAS ES ACEPTADO QUE LAS SECRECIONES DEL NEMATODO, DEBEN SER LOS PRINCIPALES INDUCTORES DEL PROCESO DE DESARROLLO QUE LLEVA A LA DIFERENCIACION DE LAS CGS, HEMOS IDENTIFICADO UNA LINEA MARCADORA EN LA QUE EL PROMOTOR DEL GEN LBD16, DIRIGE LA EXPRESION DE GFP, QUE SE ACTIVA CON SECRECIONES Y EN MOMENTOS TEMPRANOS DE LA INFECCION, PROPONEMOS USARLA PARA AISLAR POR LCM ACOPLADA A EPIFLUORESCENCIA, LAS CELULAS PRIMERAS EN LAS QUE SE ACTIVA TRAS LA INFECCION, Y QUE POSIBLEMENTE SERAN LAS CPS DE LAS CGS EN EL CILINDRO VASCULAR, TRATAREMOS TAMBIEN PROTOPLASTOS DE ESTA LINEA CON SECRECIONES DEL NEMATODO, SORTEAREMOS LAS CELULAS QUE EXPRESAN GFP Y ANALIZAREMOS CAMBIOS GLOBALES DE EXPRESION, ES POSIBLE QUE IDENTIFIQUEMOS REDES TRANSCRIPCIONALES ESPECIFICAS DE CGS QUE MEDIEN SU DIFERENCIACION MEDIANTE SECRECIONES, UTILIZAREMOS TAMBIEN LOS DATOS DE LOS TRANSCRIPTOMAS DE CGS DE TOMATE ANALIZADOS, JUNTO CON OTROS IN SILICO, PARA IDENTIFICAR GENES CONSERVADOS ESPECIFICOS, UN PROBLEMA A LA HORA DE DISEÑAR UNA HERRAMIENTA BIOTECNOLOGICA DE CONTROL RESPETUOSA CON EL MEDIO AMBIENTE, ES SU EXPRESION RESTRINGIDA EN EL LUGAR DE ACCION FRENTE AL NEMATODO, POR ELLO TAMBIEN USAREMOS UNA MODIFICACION DEL SISTEMA DE ¿ENHANCING¿ UAS-GAL4, PARA TESTAR LA ACTIVACION DE PROMOTORES SELECCIONADOS MEDIANTE GUS Y GFP IDENTIFICANDO AQUELLOS MAS RESTRINGIDOS A CGS, ESTA ESTRATEGIA, PERMITIRA CRUZAR PLANTAS UAS::GEN MODIFICADO, PARA ENSAYAR LAS COMBINACIONES PROMOTOR-GEN MODIFICADO, MAS EFICACES QUE FINALMENTE SERAN PROBADAS EN OTRAS ESPECIES,