Descripción del proyecto
LOS VIROIDES, A PESAR DE SUS GENOMAS MINIMOS (SON RNAS CIRCULARES NO CODIFICANTES DE 250-400 NT), INFECTAN Y A MENUDO CAUSAN ENFERMEDADES EN PLANTAS, ESTOS AGENTES SE REPLICAN, EN EN NUCLEO (FAMILIA POSPIVIROIDAE) O EN LOS CLOROPLASTOS (FAMILIA AVSUNVIROIDAE), POR UN MECANISMO DE CIRCULO RODANTE QUE CONLLEVA: 1) TRANSCRIPCION RNA-RNA (CATALIZADA POR RNA POLIMERASAS DEPENDIENTES DE DNA REDIRIGIDAS A ACEPTAR MOLDES DE RNA, LO QUE EXPLICARIA LA ALTA TASA DE MUTACION MEDIDA EN UN VIROIDE), 2) CORTE DE LOS INTERMEDIARIOS REPLICATIVOS RESULTANTES (MEDIADO POR ENZIMAS DEL HUESPED O POR RIBOZIMAS DEL VIROIDE), Y 3) CIRCULARIZACION DE LAS CADENAS DE LONGITUD UNITARIA (FACILITADA POR UNA RNA LIGASA O UNA DNA LIGASA REDIRIGIDA A ACTUAR SOBRE SUBSTRATOS DE RNA), ADEMAS, PARA INVADIR SUS HUESPEDES, LOS VIROIDES DEBEN MOVERSE INTRACELULARMENTE Y LUEGO A CELULAS ADYACENTES Y A PARTES DISTALES DE LA PLANTA, PROCESOS CONTROLADOS POR MOTIVOS ESTRUCTURALES ESPECIFICOS DE RNA, DURANTE LA COLONIZACION DEL HUESPED, LOS VIROIDES PUEDEN SUFRIR DRAMATICAS REDUCCIONES DE POBLACION (CUELLOS DE BOTELLA) IMPUESTAS POR EL HUESPED Y EL VIROIDE INFECTANTE, QUE COMO LOS VIRUS, PARECE MOSTRAR UN COMPORTAMIENTO TERRITORIAL (EXCLUSION POR SUPERINFECCION),PARA CONTENER A LOS INVASORES, PARTICULARMENTE VIRUS DE RNA, LAS PLANTAS HAN DESARROLLADO UN MECANISMO DE SILENCIAMIENTO POR RNA QUE DEPENDE DE LA GENERACION POR ENZIMAS DICER-LIKE (DCL) DE PEQUEÑOS RNAS VIRALES DE 21-24 NT QUE CARGAN Y GUIAN PROTEINAS ARGONAUTA (AGO), EL COMPONENTE CLAVE DEL COMPLEJO DEL SILENCIAMIENTO POR RNA (RISC), A REPRIMIR EL RNA VIRAL, LA IDENTIFICACION DE PEQUEÑOS RNAS VIROIDALES (VD-SRNAS) CON PROPIEDADES SIMILARES EN INFECCIONES POR MIEMBROS DE AMBAS FAMILIAS, SUSTENTA QUE LOS VIROIDES TAMBIEN SON DIANAS DE DCLS, ADEMAS, EN HOJAS DE NICOTIANA BENTHAMIANA INFECTADA POR UN VIROIDE DE REPLICACION NUCLEAR, LA AGO1 ENDOGENA, ASI COMO LAS AGO1, AGO2, AGO4 Y AGO5 DE ARABIDOPSIS THALIANA SOBREXPRESADAS, SE ASOCIAN CON VD-SRNAS CON LAS PROPIEDADES (NUCLEOTIDO 5-TERMINAL Y TAMAÑO) PREVIAMENTE ESTABLECIDAS PARA PEQUEÑOS RNAS ENDOGENOS Y VIRALES; ASIMISMO, DICHA SOBREXPRESION ATENUO LA ACUMULACION VIROIDAL, SUGIRIENDO QUE RISC TIENE UN PAPEL EN LA DEFENSA ANTIVIROIDAL, EL SILENCIAMIENTO POR RNA, SIN EMBARGO, ES UNA CALLE DE DOS SENTIDOS, Y LOS VIROIDES PROBABLEMENTE USAN ESTE MECANISMO PARA MODULAR LA EXPRESION DEL GENOMA DEL HUESPED Y OCASIONALMENTE INDUCIR SINTOMAS, QUE MAS QUE CONSECUENCIA FORTUITA DE LA INFECCION, PUDIERAN SER UN EFECTO BUSCADO PARA INCREMENTAR LA SUPERVIVENCIA DEL VIROIDE,EN EL PROYECTO ABORDAREMOS LAS CUESTIONES: 1) ¿COMO COLONIZAN LOS VIROIDES A SUS HUESPEDES Y COMO EVOLUCIONAN EN ESTE PROCESO?, 2) ¿DIRIGEN LOS VD-SRNAS EL CORTE DE RNAS DEL HUESPED Y DEL VIROIDE, Y SI ES ASI, CON QUE EFECTOS EN LA PATOGENESIS Y EL TITULO VIROIDAL?, Y 3) ¿OCURRE LA DEGRADACION DE LOS RNAS VIROIDALES POR OTRAS RUTAS ALTERNATIVAS AL SILENCIAMIENTO POR RNA?, ADEMAS, BASADOS EN RESULTADOS DEL PROYECTO PRECEDENTE, TAMBIEN: I) EXPLORAREMOS SI LA RADIACION UV DE N, BENTHAMIANA INFECTADA POR PSTVD INDUCE LA FORMACION DE ADUCTOS PSTVD-PROTEINA IN VIVO Y, EN SU CASO, LOS CARACTERIZARIAMOS POR ESPECTROMETRIA DE MASAS II) EXAMINAREMOS POSIBLES INTERACCIONES DE PSTVD CON PROTEINAS NUCLEOLARES CARACTERISTICAS, COMO LA FIBRILARINA Y ALGUNA HISTONA(S), Y III) DETERMINAREMOS LAS PROPIEDADES MOLECULARES Y BIOLOGICAS DE UN NUEVO VIROIDE DE ORNAMENTALES, Y DE UN AISLADO ATIPICO DE UN VIROIDE DE MELOCOTONERO, VIROIDES\PEQUEÑOS RNAS NO CODIFICANTES\RNAS CATALÍTICOS\SILENCIAMIENTO POR RNA