Descripción del proyecto
CON UN PEQUEÑO GENOMA DE RNA CIRCULAR MONOCATENARIO (246-401 NT), LOS VIROIDES SON UNA CLASE DE RNAS NO CODIFICANTES QUE INFECTAN PLANTAS EN LAS QUE FRECUENTEMENTE INDUCEN ENFERMEDADES, DEBIDO A QUE PARA SU REPLICACION Y MOVIMIENTO DEPENDEN EXTREMADAMENTE DE SUS HUESPEDES, LOS VIROIDES OFRECEN OPORTUNIDADES UNICAS PARA ESTUDIAR RELACIONES ESTRUCTURA-FUNCION EN EL RNA, Y EN PARTICULAR LAS QUE DETERMINAN AMBOS ASPECTOS (REPLICACION Y MOVIMIENTO), LOS 30 VIROIDES CONOCIDOS SE CLASIFICAN EN DOS FAMILIAS: POSPIVIROIDAE, ESPECIE TIPO POTATO SPINDLE TUBER VIROID (PSTVD), Y AVSUNVIROIDAE, ESPECIE TIPO AVOCADO SUNBLOTCH VIROID (ASBVD), PSTVD Y ASBVD SE REPLICAN (Y ACUMULAN) EN EL NUCLEO Y EL CLOROPLASTO, RESPECTIVAMENTE, UN PATRON QUE PARECEN SEGUIR LOS OTROS MIEMBROS DE AMBAS FAMILIAS,LOS VIROIDES SE REPLICAN POR UN MECANISMO DE CICULO RODANTE CON INTERMEDIARIOS DE RNA Y TRES ETAPAS QUE, CON VARIACIONES, SE REPITEN PARA LAS CADENAS DE LAS DOS POLARIDADES: I) SINTESIS DE CADENAS OLIGOMERICAS POR UNA RNA POLIMERASA QUE TRANSCRIBE REITERADAMENTE EL MOLDE CIRCULAR INICIAL, II) CORTE A LONGITUD UNITARIA POR UNA ENZIMA O RIBOZIMA, Y III) CIRCULARIZACION POR UNA RNA LIGASA O AUTOCATALITICAMENTE, LOS VIROIDES MODULAN LA ESPECIFICIDAD DE CIERTAS RNA POLIMERASAS NUCLEARES O CLOROPLASTICAS DEPENDIENTES DE DNA PARA QUE ACEPTEN MOLDES DE RNA; ESTO CONLLEVA UNA DISMINUCION DE SU PROCESIVIDAD QUE PROMUEVE EL CAMBIO DE MOLDE DURANTE LA TRANSCRIPCION Y FACILITA LA APARICION DE RECOMBINANTES, ESPECIALMENTE EN LA FAMILIA AVSUNVIROIDAE, EN ESTA MISMA FAMILIA, DE FORMA NOTABLE, EL CORTE (Y QUIZAS LA LIGACION) ES MEDIADO POR RIBOZIMAS DE CABEZA DE MARTILLO,EL DESCUBRIMIENTO EN PLANTAS INFECTADAS POR MIEMBROS DE LAS DOS FAMILIAS DE PEQUEÑOS RNAS VIROIDALES (VD-SRNAS) SIMILARES ESTRUCTURALMENTE A LOS PEQUEÑOS RNAS INTERFERENTES (SIRNAS) ASOCIADOS AL SILENCIAMIENTO GENICO POSTRANSCRIPCIONAL (PTGS), SOSTIENE LA HIPOTESIS DE QUE LOS VIROIDES SON INDUCTORES, DIANA (Y PUEDE QUE SUPRESORES) DE ESTA RESPUESTA DEFENSIVA DE SUS HUESPEDES, LA FUERTE ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL RNAS GENOMICO VIROIDAL, SIMILAR A LA DE LOS PRECURSORES DE LOS MIRNAS, LOS HACE PROBABLEMENTE SUSCEPTIBLES A UNA O MAS ISOENZIMAS DE LA CLASE DICER, COMO SE DERIVA DE LA CARACTERIZACION DE LOS VD-SRNAS DE DOS MIEMBROS DE LA FAMILIA POSPIVIROIDAE, ADEMAS, LOS INTERMEDIARIOS REPLICATIVOS BICATENARIOS, Y LOS DSRNAS GENERADOS POR UNA O MAS RNA POLIMERASAS DEPENDIENTES DE RNA, SON FUENTES POTENCIALES DE OTROS VD-SRNAS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS, RESPECTIVAMENTE, SIN EMBARGO, LA CUESTION DE SI ESTOS RNAS SON REALMENTE SIRNAS (QUE REGULAN LA REPLICACION, INVASION Y PATOGENESIS VIROIDAL), O SUBPRODUCTOS, PERMANENCE ESENCIALMENTE SIN RESPUESTA,CON EL PRESENTE PROYECTO PRETENDEMOS ABORDAR ESTA CUESTION GENERAL ASI COMO OTRA RELATIVA AL PAPEL DE LA RECOMBINACION DE RNA EN VIROIDES, DE FORMA MAS ESPECIFICA NUESTROS OBJETIVOS SON: 1) DETERMINAR EL PAPEL DE LAS RIBOZIMAS DE CABEZA DE MARTILLO EN LA LIGACION DE RNA Y EN LA SELECCION EVOLUTIVA DE CIERTOS MOTIVOS, Y PROFUNDIZAR EN SUS RELACIONES ESTRUCTURA-FUNCION, 2) CARACTERIZAR MOLECULARMENTE LOS VD-SRNAS ASOCIADOS AL PTGS EN MIEMBROS REPRESENTATIVOS DE LAS DOS FAMILIAS, 3) ESTABLECER LA FUNCION DE LOS VD-SRNAS EN LA REGULACION DEL TITULO VIROIDAL Y EN LA INVASION DEL MERISTEMO APICAL, 4) INVESTIGAR EL PAPEL DE LOS VD-SRNAS EN LA PATOGENESIS Y PROTECCION CRUZADA, Y 5) ESTUDIAR LA EVOLUCION EXPERIMENTAL DE UN VIROIDE DE REPLICACION CLOROPLASTICA, Viroide\RNAs catalíticos\ribozimas de cabeza de martillo\silenciamiento por RNA\recombinación de RNA