Descripción del proyecto
UNA SERIE DE DESCUBRIMIENTOS RECIENTES EN BIOLOGIA MOLECULAR (RIBOZIMAS, INCLUYENDO RIBOSOMA Y ESPLICEOSOMA, RIBOINTERRUPTORES, SILENCIAMIENTO DE RNA, RNAS NO CODIFICANTES, ¿) HAN CONTRIBUIDO ESTABLECER LA NUEVA APRECIACION DE QUE EL RNA TIENE UN PAPEL TODAVIA MAS IMPORTANTE EN LOS PROCESOS BIOLOGICOS DEL QUE TRADICIONALMENTE SE LE HABIA ASIGNADO, EN LA MAYORIA DE LOS CASOS, EL RNA DESARROLLA SU FUNCION A TRAVES DE LA INTERACCION CON OTROS FACTORES CELULARES, PRINCIPALMENTE PROTEINAS, EN MULTIPLES PROCESOS BIOLOGICOS COMO LA REPLICACION, TRANSCRIPCION, SPLICING, TRADUCCION, TRANSPORTE, REGULACION DE LA EXPRESION GENICA, ETC,; POR LO QUE LAS INTERACCIONES RNA-PROTEINA SON UN PROCESO BASICO Y FUNDAMENTAL EN LA BIOLOGIA MOLECULAR DE TODOS LOS SERES VIVOS, UN SISTEMA PARTICULARMENTE INTERESANTE PARA ESTUDIAR ESTE TIPO DE INTERACCIONES ES LA RELACION QUE SE ESTABLECE ENTRE PATOGENOS VIRALES Y SUBVIRALES CON GENOMA DE RNA Y SUS HUESPEDES LAS PLANTAS, COMO ES EL CASO DE LAS INFECCIONES POR POTYVIRUS Y VIROIDES, DADO EL GENOMA CON CAPACIDAD CODIFICANTE TAN LIMITADA DE ESTE TIPO DE PATOGENOS, UN PEQUEÑO NUMERO DE FACTORES DEL PATOGENO (RNAS VIRALES Y PROTEINAS QUE ESTOS CODIFICAN, MUCHAS DE ELLAS CON ACTIVIDAD DE UNION A RNA) INTERACCIONAN CON MULTIPLES FACTORES DE LA PLANTA DESENCADENANDO, EN LOS CASOS COMPATIBLES, UN COMPLEJO PROCESO INFECCIOSO, INTIMAMENTE INTRINCADO CON LA BIOLOGIA MOLECULAR DEL HUESPED, LOS POTYVIRUS TIENEN UN GENOMA DE RNA DE APROXIMADAMENTE 10 000 NT QUE CODIFICA UNAS 10 PROTEINAS Y CONSTITUYEN EL GRUPO MAS NUMEROSO, CON DIFERENCIA, DE VIRUS DE PLANTAS, LOS VIROIDES SON PATOGENOS DE PLANTAS QUE SE REPLICAN EN EL NUCLEO (FAMILIA POSPIVIROIDAE) O CLOROPLASTO (FAMILIA AVSUNVIROIDAE) DEL HUESPED Y TIENEN GENOMAS DE RNA MINIMOS (246-401 NT) QUE NO CODIFICAN NINGUNA PROTEINA, LA FINALIDAD DE ESTE PROYECTO ES INVESTIGAR ASPECTOS BASICOS DE LA BIOLOGIA MOLECULAR DEL RNA Y LAS PROTEINAS CON LAS QUE ESTE INTERACCIONA UTILIZANDO COMO MODELO LA INTERACCION QUE SE PRODUCE ENTRE FACTORES DE PATOGENOS DE TIPO VIRAL Y SUBVIRAL CON GENOMA DE RNA (POTYVIRUS Y VIROIDES) Y FACTORES DE SUS HUESPEDES LAS PLANTAS, ASI COMO DISEÑAR HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS BASADAS EN EL CONOCIMIENTO DE ESTAS INTERACCIONES, PARA ELLO, SE PROPONE LLEVAR A CABO EXPERIMENTOS DE ENTRECRUZAMIENTO IN VIVO RNA-PROTEINA, INMUNOPRECIPITACION, ANALISIS DE COMPLEJOS RNA-PROTEINA POR ESPECTROMETRIA DE MASAS Y MICROMATRICES DE DNA, ENSAYOS BIOQUIMICOS DE UNION RNA-PROTEINA Y ANALISIS GENETICO DE LAS INTERACCIONES RNA-PROTEINA EN SISTEMAS EXPERIMENTALES MODELO COMO ARABIDOPSIS THALIANA Y CHLAMYDOMONAS REINHARDTII, PARA ALCANZAR LOS SIGUIENTES OBJETIVOS: (1) IDENTIFICAR PROTEINAS DEL HUESPED QUE INTERACCIONAN IN VIVO CON RNAS DE PATOGENOS DE RNA DE PLANTAS (POTYVIRUS Y VIROIDES) Y RNAS DEL HUESPED QUE INTERACCIONAN IN VIVO CON PROTEINAS DE PATOGENOS DE RNA DE PLANTAS (POTYVIRUS), (2) CARACTERIZAR BIOQUIMICAMENTE LAS INTERACCIONES RNA-PROTEINA PATOGENO-HUESPED IDENTIFICADAS, Y (3) CARACTERIZAR FUNCIONALMENTE DICHAS INTERACCIONES Y DESARROLLAR HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS BASADAS EN ESTE CONOCIMIENTO, RNA-proteína\patógeno-huésped\potyvirus\viroide