Descripción del proyecto
LAS MEMBRANAS EXTERNAS DE LAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS CONTIENEN FRECUENTEMENTE COMPONENTES ESENCIALES PARA INTERACCIONAR CON EL HOSPEDADOR, PARA LLEVAR A CABO LA INFECCION Y DESARROLLAR LA ENFERMEDAD. EN ESTE SUB-PROYECTO, SE LLEVARA A CABO LA OPTIMIZACION DE LA PRODUCCION EN ESCHERICHIA COLI DE LOS RECEPTORES DE MEMBRANA FSTC (RECEPTOR DE AMONABACTINAS) DE AEROMONAS SALMONICIDA SUBSP SALMONICIDA Y FRPA (RECEPTOR DE PISCIBACTINA) DE PHOTOBACTERIUM DAMSELAE SUBSP PISCICIDA PARA COMBINARLAS Y PODER VALORIZAR SU APLICACION COMO VACUNA POLIVALENTE FRENTE A LA FORUNCULOSIS Y LA PHOTOBACTERIOSIS. LA VERSION RECOMBINANTE DE ESTAS PROTEINAS HA SIDO YA OBTENIDA POR NOSOTROS EN E. COLI EN PROYECTOS PREVIOS Y EN EL PROYECTO DE ORIGEN, DONDE SE DEMOSTRO LA EXPRESION EN SU FORMA NATIVA EN LAS MEMBRANAS EXTERNAS Y SE DEMOSTRO QUE AMBAS PROTEINAS MUESTRAN NOTABLES GRADOS DE PROTECCION POR SEPARADO. ENTRE LAS ESTRATEGIAS DE OPTIMIZACION SE EMPLEARAN NUEVAS CEPAS DE E. COLI QUE SEAN CAPACES DE EXPRESAR LAS PROTEINAS DE TIPO BARRIL-BETA EN SU MEMBRANA EXTERNA. ADEMAS, SE VARIARAN LAS CONDICIONES DE CULTIVO COMO LA TEMPERATURA Y EL PH CON LAS QUE HEMOS DEMOSTRADO QUE SE PUEDE AUMENTAR LA PRODUCCION DE LA PROTEINA HASTA UN 300%. UNA VEZ MAXIMIZADA SU PRODUCCION, SE PROCEDERA A LA PURIFICACION EN SU FORMA NATIVA PARA REALIZAR LOS ENSAYOS DE VACUNACION FRENTE A LA FORUNCULOSIS Y LA FOTOBACTERIOSIS EN DISTINTAS CONDICIONES. POR OTRO LADO, CON LA FINALIDAD DE ABARATAR LA PRODUCCION A NIVEL INDUSTRIAL, SE PREPARARAN EXTRACTOS DE E. COLI QUE EXPRESEN ESTAS PROTEINAS RECOMBINANTES EN SU MEMBRANA EXTERNA Y SE PROBARA SU EFICACIA COMO VACUNA CONTRA LA FORUNCULOSIS Y LA FOTOBACTERIOSIS. POR ULTIMO, LA ENCAPSULACION DE LAS PROTEINAS RECOMBINANTES EN LIPOSOMAS PERMITIRA ENSAYAR NUEVOS SISTEMAS DE ADMINISTRACION Y EVALUAR ASI TAMBIEN SU EFECTO EN LA EFICACIA COMO VACUNA.