Descripción del proyecto
EL ESTRES OSMOTICO ES UN ESTIMULO FUNDAMENTAL PARA LAS CELULAS EUCARIOTAS Y DESENCADENA UNA RESPUESTA COMPLEJA PARA SOBREVIVIR, REPARAR DAÑOS Y AJUSTAR LA CELULA A LAS NUEVAS CONDICIONES DE SU ENTORNO, LA ADAPTACION AFECTA A FUNCIONES FISIOLOGICAS MUY DISTINTAS, COMO LA PROGRESION DEL CICLO CELULAR, LA REGULACION DE LA TRADUCCION, EL MANTENIMIENTO DE LA HOMEOSTASIS DE IONES, LA BIOSINTESIS DE OSMOLITOS Y LA ACTIVACION MASIVA DE LA EXPRESION DE GENES DE DEFENSA EN EL NUCLEO, ACTUALMENTE LOS ESTUDIOS QUE EMPLEAN A ORGANISMOS UNICELULARES COMO LA LEVADURA SACCHAROMYCES CEREVISIAE, DESCUBREN LA GRAN COMPLEJIDAD DE MECANISMOS MOLECULARES IMPLICADOS EN LA ADAPTACION, EL USO DE MODELOS DE PLANTAS SUPERIORES COMO ARABIDOPSIS THALIANA PERMITE IDENTIFICAR LOS DETERMINANTES DE LA TOLERANCIA A SEQUIA, Y DESARROLLAR HERRAMIENTAS PARA MEJORAR EL CRECIMIENTO DE PLANTAS DE INTERES ECONOMICO, EL PROYECTO SE CENTRARA EN EL ESTUDIO DE DOS MECANISMOS ESENCIALES PARA LA ADAPTACION AL ESTRES OSMOTICO EN ORGANISMOS EUCARIOTAS: (A) LA ASOCIACION CON LA CROMATINA REGULADA POR ESTRES DE LAS QUINASAS INVOLUCRADAS EN LA SEÑALIZACION, (B) LA ESTIMULACION DE LA FUNCION MITOCONDRIAL,(A) LAS QUINASAS DE SEÑALIZACION QUE REGULAN LA TRANSCRIPCION, SE ASOCIAN DE FORMA ESTABLE CON LA CROMATINA, EN LEVADURA EXISTEN DOS QUINASAS, LA MAP QUINASA HOG1 Y LA PROTEINA QUINASA SCH9, QUE SON RECLUTADAS DE FORMA DINAMICA A GENES OSMOINDUCIBLES, LA APLICACION DE METODOS PARA CUANTIFICAR LA ASOCIACION DE LAS QUINASAS A LA CROMATINA IN VIVO (CHIP Y CHIP-CHIP) ES IMPRESCINDIBLE PARA COMPRENDER LA RESPUESTA AL ESTRES TANTO AL NIVEL DEL GEN INDIVIDUAL COMO AL NIVEL GENOMICO, NUESTRO GRUPO HA APLICADO CHIP CON EXITO A LAS QUINASAS HOG1 Y SCH9 DE LEVADURA, EN EL PROYECTO PROPUESTO DISEÑAREMOS Y ESTABLECEREMOS UN SISTEMA CELULAR DE ARABIDOPSIS THALIANA PARA LA APLICACION DE CHIP Y CHIP-CHIP A FACTORES DE TRANSCRIPCION Y QUINASAS, LAS MOLECULAS DE INTERES PRINCIPAL SERAN LAS MAP QUINASAS MPK4 Y MPK6 (HOMOLOGOS FUNCIONALES DE HOG1) Y LAS PROTEINA QUINASAS ATPK6 Y ATPK19 (ORTOLOGOS DE SCH9) DE ARABIDOPSIS THALIANA, EL SISTEMA DE LA EXPRESION TRANSITORIA EN PROTOPLASTOS SERA APLICADA PARA CUANTIFICAR LA ASOCIACION DE LAS QUINASAS A GENES INDUCIBLES POR ESTRES OSMOTICO, AL NIVEL GENOMICO, EL ANALISIS CHIP-CHIP IDENTIFICARA LOS GENES DIRECTAMENTE REGULADOS POR CADA QUINASA Y NOS PERMITIRA CARACTERIZAR EL IMPACTO DE CADA FACTOR EN LA RESPUESTA AL ESTRES OSMOTICO DE LA PLANTA,(B) LA BIOMASA Y LA ACTIVIDAD MITOCONDRIAL AUMENTAN DURANTE LA ADAPTACION AL ESTRES OSMOTICO EN CELULAS DE LEVADURA Y DE ARABIDOPSIS THALIANA, EN EL PRESENTE PROYECTO SE CUANTIFICARA LA ACTIVACION DE LA MITOCONDRIA EN RESPUESTA A ESTRES, SE INVESTIGARAN LAS BASES REGULADORAS DEL PROCESO Y SE IDENTIFICARAN LOS CAMBIOS DEL PROTEOMA MITOCONDRIAL QUE ACOMPAÑAN LA ADAPTACION, SE EMPLEARAN LOS DOS MODELOS DE LEVADURA Y DE ARABIDOPSIS PARA DETERMINAR LA ADAPTACION MITOCONDRIAL, SE DETERMINARAN LOS CAMBIOS DE LA MORFOLOGIA Y DE LA BIOMASA, LA ACTIVIDAD DE ENZIMAS CLAVES Y LA EXPRESION DE GENES NUCLEARES QUE CODIFICAN FUNCIONES MITOCONDRIALES, SE INVESTIGARAN LOS PAPELES DE LA MITOCONDRIA EN LA DEFENSA A ESTRES OXIDATIVO Y COMO PRODUCTOR DE ATP DURANTE EL CHOQUE OSMOTICO, SE IDENTIFICARAN LOS CAMBIOS EN LA COMPOSICION PROTEICA POR MARCAJE DIFERENCIAL DEL PROTEOMA MITOCONDRIAL EN AUSENCIA Y PRESENCIA DE ESTRES EN COMBINACION CON 2D-PAGE, Estrés osmótico\cromatina\función mitocondrial\Saccharomyces cerevisiae\Arabidopsis thaliana\señalización